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本文以新西兰兔为实验材料,考察了目前几种最常用的骨髓间充质干细胞分离方法,分析兔骨髓间充质干细胞在体外短期培养及长期培养过程中的增殖能力,同时考察了长期培养过程中细胞定向诱导成骨能力的变化。在此基础上,将微载体动态培养技术引入骨髓间充质干细胞的体外扩增,对微载体培养的接种条件和生长条件进行了优化,并对微载体培养收获细胞的各项功能进行了鉴定。
研究表明采用剪碎法与全骨髓贴壁法相结合分离骨髓间充质干细胞可获得最高的骨髓利用率;在体外短期培养中随着传代次数的增加,整个细胞群体呈现越来越高的生长速率,当长期培养至十六代以后,细胞群体普遍对数生长期缩短,增殖速率放缓,到三十代以上时,细胞增殖速率迅速降低。
在微载体培养接种条件优化实验中,采用间歇搅拌、50%培养体积接种、降低接种血清浓度至4%、使用αMEM基础培养基的综合方法,可使骨髓间充质干细胞在微载体上的贴附率显著提高。与静态培养相比,微载体动态培养收获的骨髓间充质干细胞克隆形成率更高、生长特性更优良、诱导成骨能力更强。