Klebsiella sp.CY-7胞外多糖的制备、提取及应用研究

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微生物胞外多糖(exopolysaccharides, EPS):是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌体分离、分泌到环境中的水溶性多糖。微生物多糖是由微生物天然合成的,具有植很多优良的性质。已被成功运用于食品、水处理和医药等工业领域。微生物多糖的产量和质量不受区域和气候条件的影响,可通过发酵工业大量生产,而且微生物是一种生产多糖的可再生资源。本文所研究的出发菌株CY-7是从济南光大水务有限公司的活性污泥中筛选得到的,该菌株在生长过程中可产生大量粘性胞外多糖。经生理生化实验鉴定和16S rDNA分析,CY-7被鉴定为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)。为进一步开发利用Klebsiella sp. CY-7所产胞外多糖,本文对Klebsiella sp. CY-7所产胞外多糖进行了较为详细的研究,包括其发酵生产、组分及结构、理化性质和在水处理领域的应用。利用发酵生产Klebsiella sp. CY-7胞外多糖,Klebsiella sp. CY-7菌产胞外多糖受多个发酵参数的影响,如培养基营养组分、发酵温度和通气量等。单因素实验研究表明,Klebsiella sp. CY-7菌产胞外多糖的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为硝酸钾。本文利用响应面法优化了Klebsiella sp. CY-7菌产胞外多糖的发酵培养基及发酵条件,响应面法优化的最佳培养基为蔗糖31.93g/L,KNO32.17g/L,K2HPO45.47g/L,NaCl0.1g/L,KH-2PO42.0g/L,(NH4)2SO40.2g/L,MgSO4·7H2O0.2g/L,菌株CY-7在优化的培养基条件发酵培养80h,所得Klebsiellac CY-7菌胞外多糖的发酵产量为13.38g/L,比培养基优化前提高了18.2%。响应面法优化的最佳培养条件为温度28.9℃,接种量10.6%,种龄13h,装液量50mL,摇床转速200rpm,初始发酵pH7.0,发酵时间80h,在优化的培养条件下Klebsiellac CY-7菌胞外多糖最大产量为15.06g/L,且比发酵条件优化前提高10.4%。发酵Klebsiella sp. CY-7菌,并用乙醇沉淀的方法得到Klebsiella sp. CY-7菌胞外多糖粗品HZ-7,经sevag法脱蛋白和Sephacryl S-500凝胶过滤层析后,得到多糖主要组分HZ-L,并对其理化性质进行了分析。HZ-L的组分测定表明其主要由多糖组成,HZ-L总糖和糖醛酸的含量分别为91.49%和41.67%。Klebsiellasp. CY-7菌胞外多糖HZ-L为白色粉末,可溶入冷水,HZ-L的水溶液为透明粘稠状。用多角度激光光散射法测得HZ-L的分子量为194KDa。从HZ-L红外光谱图可以发现3425cm-1处-OH的伸缩振动,这是糖类共有的,因为糖类存在着分子间或分子内的氢键,-OH的伸缩振动在3600cm-1-3200cm-1出现一种宽峰。2920cm-1处为C-H的伸缩振动。1724cm-1和1616cm-1处为羧基的C=O伸缩振动,1053cm-1处为各种C-O的伸缩振动。Klebsiella sp. CY-7菌产胞外多糖HZ-7作为生物絮凝剂对印染污水和黄河泥浆水具有良好的絮凝效果,对黄河泥浆水的絮凝率为93.72%,对印染废水的絮凝率为94.67%。研究了Klebsiella sp. CY-7菌产胞外多糖HZ-7对重金属Cr (VI)的脱除能力。探讨了溶液的pH值、反应时间和重金属溶液浓度等因素对脱除能力的影响。溶液中Cr (VI)以Cr2O72-的形式存在。结果表明,HZ-7在pH0.5-1.0的酸性条件下对Cr (VI)的吸附效果最好。HZ-7对10mg/L铬离子的吸附非常迅速,80分钟的时候吸附率达到平衡,吸附率为99%左右,吸附效果明显。HZ-7对低浓度Cr (VI)吸附效果较好,当Cr (VI)浓度为1-50mg/L时,脱除率达95%以上。吸附Cr (VI)前后的HZ-7的红外光谱显示,羟基结合Cr (VI)后,3417cm-1处的-OH的伸缩振动峰强度减弱,并发生约5cm-1的位移。同样,2918cm-1处的C-H伸缩振动的相对强度也随之减弱,1643cm-1处酰胺I基团的伸缩振动相对强度减弱,并发生约6cm-1的位移。
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