目的:双微体(Double minutes,DMs)是细胞内环状成对,可自主复制的额外染色体成分,是基因扩增的细胞遗传学标记,大量研究表明其上扩增的基因与细胞耐药相关,并为宿主细胞的增殖和抗凋亡提供了一种选择性的生长优势。氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)作为一种周期特异性的抗肿瘤化疗药物广泛应用于各种恶性肿瘤和自身免疫病的治疗。然而,在肿瘤治疗中长期大量应用时会产生药物抗性,导致治疗效果不佳。我们前期研究发现,MTX可以诱导小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3产生DMs,并且这种具有MTX抗性细胞的DMs数目随着药物浓度的升高而显著增加。说明DMs的出现与细胞耐药存在着密切的联系,本课题主要从比较蛋白质组学方法入手,为研究DMs产生和MTX耐药的机制提供线索。　　 方法:本研究以小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3及其经MTX诱导产生的含有DMs的耐药细胞系MTX400(可耐受400μmol/L MTX)为模型,通过细胞培养、蛋白提取、双向电泳、质谱鉴定等技术筛选两种细胞中的差异表达蛋白质,并对其中部分差异点进行mRNA水平和蛋白水平的验证。　　 结果:通过双向电泳技术,共筛选出了51个差异表达蛋白,有14个为假定蛋白,无法进行验证。对其它37个基因进行了mRNA水平的验证,其中13个基因进行了蛋白水平的验证。结果表明:Psmb2、Grb2和Histlh2aa在NIH3T3和MTX400两种细胞系中的蛋白水平上存在差异表达。　　 结论:1.染色体核型分析显示NIH3T3细胞经MTX诱导后产生的MTX400细胞中可看见大量的DMs。说明小鼠胚胎成纤维细胞系是研究MTX耐药机制和双微体产生机制的良好模型。2.Psmb2、Grb2和Histlh2aa在NIH3T3和MTX400细胞中的蛋白水平上存在表达差异,提示其与耐药及双微体的形成密切相关。