衰老是生物体经历的一个长期的功能逐渐下降的过程。在当今社会中,人口老龄化问题变得日趋严重,有关抗衰老及其机理的研究一直是生物学、医学等领域的研究热点。为了减少过氧化对生物体造成的损伤,合成类抗氧化剂应运而生。但是合成类抗氧剂药物对生物体的身体有很大的损害,因此寻找一种天然的无毒副作用的抗衰老药物显得尤为重要。金福菇是一种具有丰富营养价值的食用菌,分布于热带和亚热带地区,只有多种生物活性。近几年以来,本课题组成员对金福菇多糖及其多种生物活性进行了研究。金福菇多糖TLH特别是它的活性片段TLH-3有很好的抗氧化的活性,它对超氧阴离子的清除率的IC50值是126 μg/mL,与抗坏血酸(Vc)的IC50值在同一数量级(111 μg/mL),而且其可以很好的抑制丙二醛(MDA)的产生。除此之外,TLH-3还对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)具有很好的保护作用。在体内抗衰老实验中发现,TLH特别是其活性组分TLH-3可以有效的提高D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠的的抗氧化能力,减缓其衰老进程。因此,为了对金福菇多糖的活性进行深入的研究,本课题通过建立体外及体内衰老模型,来研究金福菇多糖延缓机体衰老的作用及其对衰老模型中蛋白的表达等各方面的影响,为天然多糖类的抗衰老药物的开发利用提供依据。1)研究金福菇多糖TLH-3对t-BHP诱导的氧化损伤的HELF细胞的保护作用。本实验首先用MTT法筛选出诱导细胞氧化损伤的t-BHP及对氧化损伤的细胞进行处理的TLH-3的最佳浓度。然后利用流式细胞术(Annexin V-PI双染)与β-半乳糖苷酶染色的方法检测TLH-3对氧化损伤的HELF细胞的保护作用。结果表明,和模型组的细胞相比,经过金福菇多糖TLH-3作用后的细胞随着多糖浓度的升高其存活率逐步提高,细胞凋亡的比率下降,β-半乳糖苷酶染色的阳性比率降低,说明金福菇多糖TLH-3可以很好的保护氧化损伤的HELF细胞。2)研究金福菇多糖TLH-3对t-BHP诱导的损伤的HELF细胞中蛋白表达的影响。研究发现,氧化损伤的HELF细胞,经过不同浓度的金福菇多糖TLH-3处理后,bcl-2蛋白表达量增高,bax、p53、caspase-3蛋白的表达量有不同程度的减少。表明TLH-3能够通过调节细胞内衰老相关蛋白的表达来调节细胞生命活动,从而起到减慢细胞衰老的作用。3)研究金福菇多糖TLH及TLH-3对D-gal诱导小鼠的衰老进程的影响。把昆明小鼠随机地分成5组,通过对小鼠连续6个周注射D-gal (120mg/kg)建立小鼠衰老模型,然后对小鼠进行灌胃：空白组(生理盐水,生理盐水),模型组(D-gal,生理盐水),阳性对照(D-gal, Vc 100mg/kg),实验组(D-gal, TLH和TLH-3200mg/kg)。药物干预结束后,断颈处死小鼠,检测其各方面的指标,对肾脏进行HE染色观察,检测肾脏p53蛋白的表达。研究发现,和模型组的小鼠相比,TLH特别是(?)H-3作用后的小鼠血清中白细胞介素6的含量减少；器官中脂褐素(LPF)的水平明显降低；肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)的活力提高,丙二醛(MDA)的水平降低；血清和肝脏的晚期糖基化终末产物(AGEs)水平下降；肝脏与肾脏中单胺氧化酶(MAO)的活力明显降低；肾脏的病理性变化在一定程度上被修复,而且肾脏中p53蛋白的表达量在一定程度上减少。这些研究结果均可表明TLH特别是TLH-3对D-gal诱导的衰老小鼠具有很好的保护作用,可以在一定程度上减缓其衰老进程,提高其生活的品质。该论文主要从衰老的自由基假说和免疫假说入手,从体内和体外衰老模型两方面多角度的研究了金福菇多糖的抗衰老生物学活性,发现其有较高的体内及体外抗衰老价值。所以金福菇多糖具有一定的开发成抗衰老药物或者佐剂的潜力。