原发性胆汁性肝硬化(Primary Biliary Cirrhosis, PBC)是一类进展缓慢的肝脏自身免疫性疾病。临床常见抗线粒体抗体(Antimitochondrial antibody, AMA)阳性、高水平的碱性磷酸酶等异常实验室指标；并伴有慢性胆汁淤积、非化脓性肝内胆管破坏等主要病理表现。中、晚期PBC患者的内科治疗没有满意的效果,且治疗手段比较单一。因此,对PBC的早期诊断治疗是非常必要的。目前,寻求新的治疗靶点是PBC研究的热点。B淋巴细胞的异常活化,自身抗体的产生是诱导PBC发病的主要因素。B细胞不仅具备产生抗体、提呈抗原等作用,而且还可以负向调节机体的免疫应答。早在20世纪90年代就有研究者在自身免疫性实验性脑脊髓炎的小鼠模型实验中发现B细胞剔除后的小鼠病情恶化程度增高,并首次在小鼠体内发现调节性B细胞(regulatory B cells, Bregs)。随后系列研究进一步证实Bregs的存在,并指出其在免疫调节作用的重要性。近年来,已有研究者分别在系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)、天疱疮、血管炎等不同的自身免疫性疾病中研究CD19+CD24hiCD38hiBreg的生物特性及相关作用。然而,有关CD19+CD24hiCD38hiBreg在PBC的研究目前尚未见任何阐述。目的：观察CD19+CD24hiCD38hiBreg在PBC患者外周血中的表达情况。分析该群细胞与疾病的相关性,并初步探讨PBC外周血中CD19+CD24hiCD38hiBreg对辅助性T细胞1(T helper cell 1, Thl)、辅助性T细胞17(T helper cell 17, Th17)细胞分化的影响,为PBC免疫机制的研究及未来治疗策略的开发提供新的实验依据。方法：1.采集PBC患者组与健康对照组(HC)的EDTA抗凝血,密度梯度离心法提取外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs),流式细胞仪检测CD19+B细胞以及CD19+CD24hiCD38hiBreg在CD19+细胞的表达频率。比较上述两者在PBC患者与正常人中的变化情况。2.采集PBC患者组血清,用Modular PPT生化分析仪检测患者的ADA、ALT、AST、 GGT、ALP、TBIL、DBIL、IBIL、TBA等肝功相关指标,分析其与CD19+CD24hiCD38hiBreg的相关性。3.流式细胞仪检测HC组中Thl、Th17细胞的频率,分别与HC组的CD19+CD24hiCD38hiBreg进行相关性分析,初步分析HC组中Thl、Th17细胞的频率与CD19+CD24hiCD38hiBreg的潜在关系。4.流式细胞仪检测PBC组中Thl、Th17细胞的频率,分别与PBC组的CD19+CD24hiCD38hiBreg进行相关性分析,初步分析PBC组中Th1、 Th17细胞的频率与CD19+CD24hiCD38hiBreg的潜在关系。4..流式分选正常人的CD4+T细胞与CD19+CD24hiCD38hiBreg、PBC的CD19+CD24hiCD38hiBreg。正常人CD4+T细胞单独培养作为对照；将正常人CD4+T细胞分别与正常人CD19+CD24hiCD38hlBreg、PBC患者的CD19+CD24hiCD38hiBreg共培养。流式检测Thl细胞的分化情况。结果：1.外周血中CD19+B细胞所占比例情况：PBC组为(12.210±6.204)%, HC组为(8.469±3.399)%；且具有显著差异(P=0.009)。此外,PBC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg/CD19+B细胞的比例(12.379±6.417)%较HC组(4.225±3.318)%的比例增高,且具有统计学意义(p=0.000)。2.PBC中CD19+CD24hiCD38hiBreg与TBIL (P=0.049, r=0.535)、DBIL (P=0.035, r=0.566、IBIL (P=0.046, r=0.521)、TBA (P=0.014, r=0.619)呈正相关性。3..HC组中Th1、Th17频率为(11.807±5.144)%、(0.846±0.904)%。其中HC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg与Thl细胞具有负相关性(P=0.017,r=-0.426),与Th17细胞没有相关性(P=0.941,r=0.014)。4.PBC组中Thl、Th17频率为(17.689±7.444)%、(1.797±2.784)%。其中PBC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg与Thl具有正相关性(P=0.003,r=0.677),与Th17没有相关性(P=0.171,r=0.348)。5.本实验将正常人CD4+T细胞单独培养作为对照；HC中CD19+CD24hiCD38hiBreg、PBC由CD19+CD24hiCD38hiBreg分别与正常人CD4+T细胞共培养,Thl细胞分化的基本情况如下：(17.367±2.747)%、(4.173±1.878)%与(48.567±7.522)%。其中,PBC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg与正常人CD4+T细胞共培养后Thl细胞分化的频率较正常人CD4+T细胞单独培养、HC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg与正常人CD4+T细胞共培养都增高,且具有统计学意义(P=0.001)、(P=0.000)。HC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg与正常人CD4+T细胞共培养后Thl细胞的分化频率较正常人CD4+T细胞单独培养、PBC组中CD19+CD24hlCD38hiBreg与正常人CD4+T细胞共培养都降低,且具有统计学意义(P=0.043)、(P=0.000)。结论：PBC患者外周血中CD19+CD24hiCD38hiBreg/CD19+B细胞的比例升高。且PBC患者外周血中CD19+CD24hiCD38hiBreg b匕例与肝内损伤呈正相关。同时,我们的实验结果初步显示PBC外周血中CD19+CD24hiCD38hi Breg促进Thl细胞的分化。