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近年疼痛已被认为是一种疾病而非临床症状。与躯体痛相比，内脏痛有着其自己独特的特点。炎症，缺血缺氧等因素可引起内脏器官出现痛觉过敏。实验表明，向内脏施加某些化学物质(如福尔马林等)，动物在致炎后可出现不同等级的内脏痛表现。蛋白激酶C(PKC)是一种重要的蛋白激酶，在神经元兴奋性的调节、信号转导、神经递质的释放、突触可塑性等过程中发挥重要的作用。近年来研究表明，PKC作为胞内第二信使参与了疼痛的发生发展和中枢敏感化的形成与维持过程。但PKC在福尔马林所致的内脏炎性痛中的作用少见报道。本实验室以往工作发现，在用福尔马林直肠粘膜下注射复制的大鼠内脏痛模型上，用Westernblot方法检测脊髓L6-S1节段神经元的结果表明，PKCγ以膜转位的形式参与了内脏痛的发生发展，但对于PKCγ是否还以其它形式参与内脏痛过程及PKC其他亚型在内脏痛中的作用未见报道。本实验应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白电泳(SDS-PAGE)、蛋白印迹(Western-blot)以及免疫组织化学等方法，观察了在直肠粘膜下注射福尔马林复制的大鼠内脏痛模型中PKCγ亚型mRNA表达及PKCη，PKCθ和PKCδ膜转位的改变，在细胞与分子水平上对PKC部分亚型在内脏痛发生发展的机制中的作用进行了探讨。
实验选用健康成年Wistar大鼠，体重200-250g，随机分为4组。(1)正常对照组[N]；(2)福尔马林直肠粘膜下注射致炎与蛛网膜下腔插管并注射生理盐水组[F+IT+NaCl]；(3)福尔马林直肠粘膜下注射致炎与蛛网膜下腔插管并注射PKC抑制剂H-7组[F+IT+H-7]；(4)福尔马林直肠粘膜下注射致炎与蛛网膜下腔插管并注射PKC激动剂PMA组[F+IT+PMA]。
本实验的研究结果如下：1.免疫组织化学实验乙醚吸入麻醉后，在大鼠直肠粘膜下注射5％福尔马林100μl。确认大鼠清醒并出现疼痛行为后，分别在致炎30min、60min和120min用多聚甲醛灌注大鼠，取L6～S1节段脊髓组织，进行后固定及蔗糖置换。用冰冻切片机将脊髓组织切成50μm的脊髓片，在PBST中分别与PKCγ的兔多克隆抗体、生物素标记的羊抗兔IgG二抗、辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素孵育。在DAB液中显色，脊髓片裱片，常规脱水透明，树脂封片后镜下观察。结果显示：在致炎后30min到120min内，所有实验组大鼠脊髓中均可见PKCγ阳性细胞表达，主要集中在脊髓背角Ⅱ板层；与对照组相比，[F+IT+NaCl]组脊髓背角PKCγ阳性表达细胞数增加；与[F+IT+NaCl]组相比，[F+IT+H-7]组阳性细胞数减少；[F+IT+PMA]组阳性细胞数增多。
2.RT-PCR实验大鼠直肠粘膜下注射5％福尔马林100μl，观察到大鼠出现疼痛反应后分别在致炎30min、60min和120min时，麻醉处死大鼠，取L6～S1节段脊髓组织迅速置于液氮中速冻，提取大鼠脊髓总RNA，用波长260nm的紫外光对RNA进行定量。同时增加直肠下注射生理盐水组[NS]以排除单纯针刺注射所引起的大鼠脊髓mRNA的变化。将[N]组，[NS]组，[F+IT+NaCl]组，[F+IT+H-7]组，[F+IT+PMA]组的mRNA反转录为cDNA，再以cDNA为模板，选取管家基因GAPDH作为内参照物，用PKCγ特异性引物进行PCR检测。上述5组PKCγ及GAPDH的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。通过PKCγ与GAPDH的电泳条带积分光光密度(IOD)比值进行半定量分析，比较各组在PKCγmRNA表达水平上的差异。结果：从致炎后30min至120min时，[N]组与[NS]组PKCγmRNA相对表达量相比，二者没有显著性差异(P＞0.05，n=6)。[F+IT+PMA]组，[F+IT+H-7]组与[F+IT+NaCl]组PKCγmRNA相对表达量两两比较也均没有显著性差别(P＞0.05，n=6)。在直肠致炎后60min时，[F+IT+NaCl]组PKCγmRNA相对表达量(16.213±3.592)较[N]组(1.107±0.478)相比有明显增加，且有显著性差异(P＜0.01；n=6)；在直肠致炎后120min时，[F+IT+NaCl]组PKCγmRNA相对表达量(5.635±0.968)较60min时有所下降，且两者相比具有显著性差异(P＜0.01，n=6)。而且致炎后120min时[F+IT+NaCl]组与[N]组的PKCγmRNA相对表达量(1.091±0.201)相比，仍有显著性差异(P＜0.05，n=6)。
3.SDSWesternblot实验在福尔马林直肠粘膜下注射致炎后30min、60min和120min3个时间段，取大鼠L6-S1节段脊髓进行SDS-Westernblot实验，观察PKCη，PKCθ和PKCδ膜转位的变化。
结果表明：[F+IT+PMA]组、[F+IT+H-7]组和[F+IT+NaCl]组分别在30min、60min和120min三个时间段内的上述PKCη，PKCθ和PKCδ三个亚型膜转位与[N]组相比均无显著性差异(P＞0.05)。
根据上述实验结果，得出以下结论：(1)在大鼠直肠粘膜下注射福尔马林后60min至120min内，L6-S1节段脊髓神经元中PKCγ亚型mRNA表达水平显著增加，提示PKCγ亚型有可能以合成量增加的形式在内脏炎症痛的发生发展过程中发挥作用。
(2)PKCθPKCη以及PKCδ亚型在福尔马林直肠粘膜下注射所致内脏炎症痛发生发展过程中可能不起重要作用。