细胞内固醇的正确分布对哺乳动物细胞的很多生物学功能,如膜组成、信号转导等都是至关重要的,其中动物细胞中含量最多的固醇为胆固醇(cholesterol)。胆固醇在细胞内的分布有多种调节机制,包括吸收、合成、排出以及转运等途径,其中胆固醇转运又可以分为囊泡运输(vesicular transport)和非囊泡运输(nonvesicular transport)。研究表明非囊泡运输主要由脂转运蛋白LTPs(Lipid Transfer Proteins)介导,LTPs家族中的一类为 StARKin 超家族,其成员包括 StART(steroidogenic acute regulatory protein-related lipid transfer)、LAMs(LTPs anchored at membrane contact sites)及其它含有 StART domain(SD)的蛋白。膜接触位点(Membrane Contact Sites,MCS)是两个细胞器或细胞膜间距离在30nm之内的紧密相邻的区域,是真核细胞脂质交换研究热点。作为近年新发现的StARKin超家族脂转运蛋白成员,LAMs蛋白含有特异性结合并转运固醇的结构域 StART domain(SD),能在内质网(endoplasmic reticulum,ER)与其他生物膜的接触位点间转运固醇。LAMs家族蛋白从酵母到哺乳动物中都是保守的,在人源中有三个同源蛋白成员LAMa-c/GramD1a-1c,酵母中有六个同源蛋白成员Lam1-6。本论文对人源LAMs蛋白(hLAMb,hLAMc)脂质结合转运功能结构域StART domain(SD)进行了一系列研究。在本论文的工作中,主要完成了以下几项工作:(1)体外构建hLAMb,hLAMc StART结构域的重组克隆,经大肠杆菌表达体系表达,筛选可溶蛋白;(2)经过亲和层析纯化、离子交换层析纯化、凝胶过滤层析纯化过程,获得hLAMb,hLAMc StART结构域纯度及浓度均较好的蛋白;(3)通过荧光实验检测了蛋白hLAMb,hLAMc StART结构域结合固醇(DHE)、磷酸肌醇(PIPs)、磷脂酰丝氨酸(PS)的能力。实验结果证明hLAMb,hLAMc蛋白能够结合固醇类脂质,但不能结合PIPs和PS;(4)根据脂质结合实验结果,制备hLAMb,hLAMc与固醇的复合物,并进行结晶条件的筛选,同时对未结合脂质配体的hLAMb,hLAMc蛋白也进行了结晶条件的筛选;(5)到目前为止,只获得了 hLAMc的晶体。