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目的：加兰他敏(galanthamine)是乙酰胆碱酯酶抑制剂,同时也是烟碱乙酰胆碱受体的变构调节配体,目前用于治疗阿尔茨海默病。本文研究加兰他敏对β淀粉样蛋白1-40(A1-40,β-amyloid protein1-40)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用及可能机制。
方法：选取SH-SY5Y细胞进行传代培养,将不同浓度Aβ1-40作用于SH-SY5Y细胞,通过噻唑蓝比色法(MTT),代谢率检测细胞活性,确定引起SH-SY5Y细胞凋亡的Aβ1-40最佳作用浓度,制备体外细胞损伤模型。应用不同浓度加兰他敏和α7烟碱乙酰胆碱受体拮抗剂(MLA)对Aβ1-40处理的细胞进行干预并与正常细胞进行对照研究,应用MTT代谢率检测细胞活性,并利用Western-blot技术检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达情况。
结果：
1、40μmol/L凝聚态Aβ1-40与传代培养的SH-SY5Y细胞共同孵育24h诱导凋亡的效果最好,细胞出现明显的凋亡改变。
2、Aβ1-40作用于SH-SY5Y细胞后24h,Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase-3蛋白表达水平升高。
3、用不同浓度加兰他敏对SH-SY5Y细胞进行预处理后再加入Aβ1-40共同孵育,发现0.9μmol/L加兰他敏对SH-SY5Y细胞有明显的保护作用,表现为MTT法检测的细胞存活率明显升高,加兰他敏预处理后的SH-SY5Y在Aβ1-40作用后24h发现Bcl-2蛋白表达水平升高,而Caspase-3表达水平降低。
4、MLA逆转加兰他敏对Aβ1-40引起细胞凋亡的保护作用,表现为MLA和加兰他敏共同作用下细胞存活率与加兰他敏预处理组相比明显下降,Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3表达升高。
结论：
1、40μmol/L 凝聚态Aβ1-40作用24h可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。
2、一定剂量的加兰他敏预处理有明显阻断Aβ1-40诱导SH-SY5Y细胞凋亡的作用,而且加兰他敏的神经保护作用可能是通过α7烟碱乙酰胆碱受体介导,上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达从而抑制Caspase-3的激活来实现的。