干扰TGF-βⅡ型受体表达对NB4细胞增殖及其对ATRA、ATO反应的作用

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lebaishi310
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目的:研究干扰TGF-βⅡ型受体稳定表达对NB4细胞的增殖能力,及其对ATRA和ATO诱导NB4细胞分化和凋亡反应的作用。方法:1、运用RNAi技术设计并构建四个慢病毒载体,筛选鉴定出有效LV-TGFBR2-RNAi(9759-1)慢病毒载体并对其进行包装,转染NB4细胞,用抗性筛选法获得稳定表达干扰TβRⅡ基因的NB4细胞,命名为TβRⅡ-shRNA NB4细胞;采用RT-qPCR方法鉴定TβRⅡ基因在NB4细胞的具体表达。2、通过台盼蓝拒染及CCK-8法了解NB4细胞及TβRⅡ-shRNANB4细胞的增殖。3、通过流式CD11b检测和瑞氏染色,观察维甲酸对TβRⅡ-shRNA NB4细胞及NB4细胞分化过程的具体影响。4、通过AnnexinV-FITC/PI-双荧光标记法及AO/EB染色研究亚砷酸对TβRⅡ-shRNANB4细胞及NB4细胞凋亡的影响。结果:1、RT-qPCR方法证实TβRⅡ在NB4细胞中稳定干扰。2、台盼蓝拒染法及CCK-8法发现TβRⅡ-shRNA NB4细胞的增殖活性高于NB4细胞,96h后TβRⅡ-shRNA NB4细胞和NB4细胞的OD值分别是1.859±0.029、1.096±0.006(P<0.0001)。3、维甲酸应用过程中,上述两种细胞都出现相应的细胞分化现象(瑞氏染色)。TβRⅡ-shRNANB4细胞表面的CD11b抗原表达量显著低于NB4细胞,呈剂量依赖性。0.1μM孵育TβRⅡ-shRNANB4细胞和NB4细胞96h,CD11b表达率分别为79.133±0.85、89.333±0.55(P<0.0001)。4、上述两种细胞,经2μM的亚砷酸进行24h的孵育后,均出现凋亡现象(AO/EB染色)。TβRⅡ-shRNA NB4细胞凋亡率显著低于NB4细胞,呈剂量依赖性。8μM孵育TβRⅡ-shRNA NB4细胞和NB4细胞24h,凋亡率分别是49.15±2.05、66.85±2.41(P<0.01)。结论:研究进一步证实TβRⅡ在NB4细胞增殖中是负性调控受体,并且参与ATRA与ATO诱导NB4细胞分化与凋亡的过程。
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