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目的:在人体,怀孕一定时期的母体中可以检测到胎儿的游历DNA,并可广泛用于非创伤性产前诊断,但在别的动物身上尚未发现类似情况,本实验以奶牛为对象,检测怀孕一定时期奶牛母体外周血中是否存在胎儿游离DNA,如果存在,初步确定其出现的最早时间,尝试利用其特性进行非创伤性产前性别鉴定的可行性。 方法:检测怀孕母牛早、中、晚期共50头,其中怀孕早期奶牛13头、怀孕中期奶牛16头、怀孕后期奶牛21头.应用Primer premier 5.0分别在奶牛SRY基因的3’端、HMG-box内、和包括HMG-box核心序列位点设计三对巢式PCR(六对引物),采集怀孕不同时期母牛外周血,处理后分别得到血浆和血清,以四种不同的方法(分别为试剂盒提取DNA、普通的苯酚/氯仿提取DNA、加热法提取DNA、直接用血浆/血清作模板)分别提取其中的DNA作为模板,应用灵敏度、敏感性、准确性都比较高的巢式PCR扩增,琼脂糖电泳后,在紫外透射仪下观察结果。 结果:其中怀孕早期胎儿尚未出生,而怀孕中、晚期血浆中检查SRY基因结果与实际性别符合率分别为87.5%(14/16)、95.24%(20/21),怀孕中、晚期血清中SRY基因检查结果与实际性别符合率分别为75.0%(12/16)、90.48%(19/21)。血浆和血清中胎儿总性别鉴定率分别为91.89%(34/37)和83.87%(31/37);而以不同的方法提取的DNA模板中又以微量DNA提取试剂盒提取的DNA作模板检出结果与性别符合率最高91.89%(34/37)、加热法提取的DNA次之为83.87%(31/37)、普通的苯酚/氯仿提取的DNA为75.68%(28/37),直接以血浆为模板未能扩增出目的条带。用三种不同的引物检测结果无明显差异,但是在HMG-box核心序列上的引物由于其序列在不同种属动物中比较保守,因而也可以扩增出小白鼠的SRY基因。 结论:1.怀孕一定时期的奶牛母体外周血中可以检测到胎儿游离DNA,并可用于