第一部分人巨细胞病毒重组蛋白的表达、纯化和免疫学性质研究　　 研究背景：　　 人巨细胞病毒(HCMV，human cytomegalovirus)属于疱疹病毒科β亚科，是双链线性DNA病毒。HCMV在人群中感染很普遍，不同国家和不同经济状况的地区CMV感染率不同，在亚洲大约90％的人口被感染，但其中多数为无症状的亚临床感染，备受重视的是先天性感染和器官移植等免疫功能低下人群的感染。先天性HCMV感染可造成胎儿的组织器官的损伤及发育的异常，如造血系统，呼吸系统，神经系统等，是引起婴儿先天性畸形的关键因素之一。目前对HCMV的感染没有合适的治疗和预防措施，所以寻找一种有效的，高灵敏度和特异性的，用于ELISA检测方法的抗原对优生优育及阻止HCMV传播有重要意义。　　 研究目的：　　 表达、纯化一种可溶性的重组CMV抗原，用于检测血清中的CMV抗体IgG，并研究该蛋白的免疫学活性，预测其用于HCMV免疫学检测的可能性，为下一步的应用提供理论依据。　　 研究方法：　　 1．选取HCMV中抗原性较强的pp150蛋白C端(aa595~614，aa1006~1048)和p52蛋白C端(aa202~433)的基因片段的三个抗原表位，人工合成cDNA序列CG3，将此序列构建入原核表达质粒；　　 2．将构建好的原核表达质粒转化人大肠杆菌BL21-(DE3)中，并在16℃下通过IPTG诱导表达，通过金属螯合层析柱对重组蛋白CG3进行纯化；　　 3．对纯化后的CG3通过western-blotting和ELISA分析其免疫学性质。　　 研究结果：　　 1．成功将人工合成的CG3序列正确构建入原核表达载体中，并转化入大肠杆菌BL21-(DE3)中；　　 2．确定重组蛋白CG3的表达条件（2YTpH7.0、添加诱导剂时菌液OD在0.5-1之间、IPTG浓度为0.5mM、温度为16℃）和可溶性（部分可溶）；　　 3．用阳性和阴性血清做为一抗检测重组抗原CG3的特异性进行鉴定，结果显示其特异性较好；　　 4．经ELISA实验比较重组蛋白CG3与SORIN抗巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒，结果显示重组蛋白的灵敏度68.75%；特异性83.05%；假阳性率31.25%；假阴性率16.95%；符合率86.82%；Kappa值0.52。重组抗原CG3与Sorin试剂检测HCMV-IgG抗体呈中度相关。　　 结论：　　 1．重组抗原CG3具有天然抗巨细胞IgG抗体识别的抗原表位，可以与人抗巨细胞病毒IgG抗体结合；　　 2．将HCMV的pp150蛋白（UL32基因）和pp52蛋白(UL44基因)的三个表位串联在一起表达，重组抗原具有较强的抗原性；　　 3．融合表达的重组抗原敏感性较差，但是避免了由于杂蛋白干扰造成的特异性降低；　　 4．本研究中所合成的重组抗原对检测抗HCMV特异性抗体Ig-G具有较强的特异性；　　 5．纯化过程较以往报道的方法简单，仅需要过HisTrap柱，便可得到纯度较高的蛋白；　　 6．重组抗原CG3具有一定的应用价值。　　 第二部分风疹病毒IgG抗体检测方法的研究　　 目的：　　 本文目的是建立一个以最低保护力的抗体水平(15IU/ml)为临界值的风疹病毒特异性IgG抗体的检测方法。　　 方法：　　 本文用优选的抗原和具有变色功能的标本稀释液，用世界卫生组织提供的标准品标定标准曲线，以常规间接ELISA方法进行检测。　　 结果：　　 对检测方法的各个环节进行了比较研究，确定了检测方法的最佳工艺流程。对1005例育龄妇女血清标本进行检测与意大利Sorin公司的试剂进行比较，两种方法呈最高度相关（Kappa值为0.85）。　　 结论：　　 我们建立的方法有较多的优越性，敏感、特异、简便、快速、可重复性好，适用于孕龄妇女RV-IgG抗体水平的筛查。