β2—肾上腺素受体激动剂作为药物治疗哮喘已经有30年了。不幸的是这类药物被非法用来作为家畜的生长促进剂,用以改善营养物质在脂肪和肌肉之间的重分配,增加瘦肉。这种非法应用对食用残留有此类药物畜产品的消费者产生了毒害作用。莱克多巴胺是β2—肾上腺素受体激动剂家族中的一员,除了美国等少数国家允许其在合理的范围内作为猪饲料添加剂使用外,大多数国家（如欧盟和我国）都禁止其作为生长促进剂使用。然而,在我国,受经济利益的驱使,许多不法企业和生产厂商利用此药物的危害还没有受到人们重视之际,进行非法添加,这给人民的身体健康和生命安全造成潜在的危害。因此,必须建立快速、灵敏、有效的检测方法。 目前,莱克多巴胺的检测方法主要有:色谱法,毛细管电泳法,免疫传感器法,酶联免疫吸附测定法（ELISA）。由于色谱法、毛细管电泳法所需的仪器设备昂贵,样品前处理复杂,一次检测样品量少,检测时间长,不易普及等缺点,因而,只作为实验室的确证方法。 酶联免疫吸附测定法（ELISA）克服了以上缺点,作为快速筛选方法,得到广泛的应用。目前此种方法在国外已有报道,并且已有商品试剂盒出售,但价格昂贵。我国还没有相关的报道。为了改变国外在此方面的垄断,降低检测成本,必须建立有自主知识产权的产品,因而在948项目的资助下,本实验旨在建立莱克多巴胺ELISA方法。 莱克多巴胺分子量仅为340,属小分子半抗原（Hapten）,本身没有免疫原性,必须与大分子载体蛋白偶联后才成为完全抗原或包被抗原,载体蛋白质一般用BSA、KLH、HSA、OVA等。 本论文用多元酸酐法和混合酸酐法相结合将盐酸莱克多巴胺与载体蛋白偶联合成了人工抗原。偶联分两步:第一步用戊二酸酐活化莱克多巴胺成莱克多巴胺-戊二酸酐半醛,第二步用混合酸酐法将其与KLH和BSA偶联,通过控制载体蛋白的浓度,合成了不同偶联比的免疫原和包被抗原。经核磁共振法和紫外吸收法鉴定,偶联成功,用紫外吸收法测定了偶联比。用免疫原免疫兔子获得了多克隆抗体,间接ELISA检测效价,以两倍的阴性血清OD值的阳性血清的稀释度为效价,达到6000以上。间接抑制ELISA检测抗血清的特异性,其IC₅₀为10ng/ml,与克仑特罗,沙丁胺醇,特布他林无交叉反应。 制作了标准曲线。间接抑制ELISA检测限为0.9ng/ml,线性范围为0.9～25ng/ml,回收率为63.5%～114.%,变异系数为3.1%～16.7%。直接竞争ELISA检测限为1ng/ml,线性范围为1～17.5ng/ml,回收率为89.4%～144.1%,变异系数为3.05%～14.36% 对ELISA质量做了评价,符合检测要求。与国外产品有差距,需进一步改善。 文中对抗原合成的影响因素,特异性的影响因素进行了较为详细的讨论,并受育种学中奶牛体型参数与产奶的相关性中得到启发,提出了免疫动物体型参数与免疫反应性的相关性的设想。