目的:评价疏肝温胆汤治疗颈动脉粥样硬化的临床疗效;基于LXRα/NFκB信号通路探讨疏肝温胆汤治疗动脉粥样硬化的机制研究,为中医药防治提供科学依据。方法:1.临床试验:采用随机、对照的方法,将纳入的80名痰瘀互结伴肝气郁结型颈动脉粥样硬化患者,按1:1的比例,随机分入试验组及对照组。两组均给予基础治疗:慢病管理和西药常规治疗。对照组给予阿托伐他汀(10mg,1次/晚),试验组给予阿托伐他汀+疏肝温胆汤(1次/天,5天/周)。观察两组患者治疗前后的颈动脉IMT、血管内皮功能、血脂、hs-CRP、纤维蛋白原、MMP-9及中医证候评分等指标。疗程为12周。2.动物实验:采用小牛血清白蛋白免疫损伤、高脂饲养和束缚情志应激的方法建立肝郁型的新西兰兔动脉粥样硬化模型。随机分为6组,每组6只,分别为模型组、阿托伐他汀组、疏肝温胆汤低、中、高剂量组、正常对照组。于造模成功后,给予灌胃治疗,阿托伐他汀(5mg/kg/d),疏肝温胆汤低、中、高剂量组分别为2.18g/kg/d、6.54 g/kg/d和19.62 g/kg/d,按4ml/kg/d灌胃。正常对照组和模型组均予同浓度生理盐水灌胃。连续灌胃6周。给药结束后,(1)超声检查各组新西兰兔颈总动脉IMT,内径及血流速度;(2)分别采用酶法、硝酸还原酶法和ELISA法检测各组血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、NO和ET-1的水平;(3)采用HE染色法检测各组主动脉的病理变化;(4)采用q PCR法检测主动脉组织中CRP、IL-1β、IL-6和MMP-9的基因表达;(5)采用Western blotting法检测主动脉组织的LXRα/NFκB信号通路的蛋白表达。3.体外实验:采用ox-LDL诱导HUVECs建立血管内皮细胞损伤模型;以疏肝温胆汤含药血清为干预措施,分为正常对照组、ox-LDL组、ox-LDL+20%疏肝温胆汤含药血清、ox-LDL+40%疏肝温胆汤含药血清、ox-LDL+60%疏肝温胆汤含药血清组。培养24h。(1)油红O染色观察HUVECs泡沫化的变化;(2)分别采用硝酸还原酶法和ELISA法检测上清液中NO和ET-1的含量;(3)QPCR法检测细胞中CRP、IL-1β、IL-6、MMP-9的基因表达;(4)Western blotting法检测LXRα/NFκB信号通路的蛋白表达。以LXRα激动剂和抑制剂为干预措施,分为ox-LDL组、ox-LDL+60%疏肝温胆汤含药血清组、ox-LDL+60%疏肝温胆汤含药血清+LXRα抑制剂(SR9243)组、oxLDL+LXRα激动剂(GW3965)组。(1)采用硝酸还原酶法和ELISA法测各组培养上清液中的NO和ET-1的水平;(2)q PCR法和Western blotting法测各组细胞中CRP、IL-1β、IL-6、MMP-9的基因表达和LXRα/NFκB信号通路的蛋白表达。结果:1.临床试验:(1)试验组与对照组在改善颈动脉粥样硬化患者颈动脉IMT方面,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,试验组的TC、LDL-C、hs-CRP、纤维蛋白原、MMP-9、ET-1水平降低,NO水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)试验组的胸胁胀闷不舒善太息、眩晕、头身困重等中医证候积分明显低于对照组,显效率及总有效率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.动物实验:(1)超声结果:与模型组比较,他汀组和疏肝温胆汤中、高浓度组的内径增宽,IMT降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);各实验组间的颈总动脉血流速差别均无统计学意义(P>0.05)。(2)病理结果:模型组血管腔明显狭窄,粥样斑块形成明显,可见大量的胞内泡沫样改变,而阿托伐他汀组和疏肝温胆汤高、中、低浓度组的血管狭窄,粥样斑块及泡沫样改变的程度均较模型组低。(3)血脂:与正常对照组比较,模型组的TG、TC和LDL-C升高,HDL降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阿托伐他汀及疏肝温胆汤低、中、高浓度组的TG、TC和LDL-C降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)内皮细胞功能:与正常对照组比较,模型组血清中NO降低,ET-1升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阿托伐他汀组和疏肝温胆汤高剂量组血清中NO升高,ET-1降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)q PCR结果:与正常对照组相比,模型组中的hs-CRP、IL-1β、IL-6和MMP-9的表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阿托伐他汀组、疏肝温胆汤低、中、高剂量组中CRP、IL-1β、IL-6和MMP-9的表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(6)Western blotting显示:与正常对照组相比,模型组中的LXRα的蛋白表达量降低,NFκB的蛋白表达量升高;与模型对照组相比,阿托伐他汀组、疏肝温胆汤各浓度组中LXRα的蛋白表达量均升高,NFκB的蛋白表达量均降低。3.体外实验:不同浓度的疏肝温胆汤含药血清干预后的结果如下。(1)油红O染色结果:与ox-LDL组比较,不同浓度疏肝温胆汤含药血清组的HUVECs内红色脂滴减少,且红色脂滴随着疏肝温胆汤浓度的增加而减少;(2)与正常组比较,模型组中NO含量降低,ET-1含量增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,OXLDL+60%疏肝温胆汤含药血清组中的NO值升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,不同浓度的疏肝温胆汤含药血清组的ET-1均降低,且存在着浓度依赖性,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)q PCR显示,与正常对照组相比,模型组的CRP、IL-1β、IL-6和MMP-9表达量都有增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,疏肝温胆汤含药血清组细胞中的CRP、IL-1β、IL-6和MMP-9表达量都有减少,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)Western blotting结果显示,与正常对照组相比较,模型组细胞中LXRα蛋白表达量降低,而NFκB蛋白表达量增高。与模型组相比,疏肝温胆汤含药血清组细胞中的LXRα蛋白表达量增高,而NFκB蛋白表达量降低。LXRα激动剂和抑制剂干预后结果如下。(1)Western blotting结果显示,与oxLDL组比较,60%疏肝温胆汤+ox-LDL组和ox-LDL+LXRα激动剂组中的LXRα的蛋白表达量均上调,NFκB的蛋白表达量均下调;与60%疏肝温胆汤+ox-LDL组比较,60%疏肝温胆汤+ox-LDL+LXRα抑制剂组的LXRα的蛋白表达量下调,NFκB的蛋白表达量上调。(2)油红O染色:与ox-LDL组比较,60%疏肝温胆汤+ox-LDL组和oxLDL+LXRα激动剂组中的红色脂滴细胞数明显减少;与60%疏肝温胆汤+ox-LDL组相比,60%疏肝温胆汤+ox-LDL+LXRα抑制剂组中的红色脂滴细胞数增多。(3)细胞上清液中NO和ET-1含量检测:与ox-LDL组比较,ox-LDL+LXRα激动剂组NO水平升高,ET-1降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL+60%疏肝温胆汤含药血清组比较,ox-LDL+60%疏肝温胆汤含药血清+LXRα抑制剂组的NO水平降低,ET-1升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)q PCR显示:与ox-LDL组比较,60%疏肝温胆汤+ox-LDL组与ox-LDL+LXRα激动剂组的CRP、IL-1β、IL-6、MMP-9的表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与60%疏肝温胆汤+ox-LDL组比较,ox-LDL+60%疏肝温胆汤含药血清+LXRα抑制剂组的CRP、IL-1β、IL-6和MMP-9的表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论(1)临床试验:疏肝温胆汤可以改善颈动脉粥样硬化患者的血脂、炎症、血管内皮功能,增加斑块稳定性及改善中医证候,提示中医中药可以多机制、多靶点防治动脉粥样硬化。(2)体内、体外实验:疏肝温胆汤通过调控LXRα/NFκB信号通路改善血管内皮细胞功能和动脉粥样斑块的稳定性,从而发挥抗动脉粥样硬化效应。