二炔噻吩类对SL细胞活性及光活化损伤机理研究

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2,5-二芳乙炔基噻吩类光活化化合物是本实验室最新合成的高活性光活化化合物,是从优秀植物源光活化农药α-三联噻吩结构改造而来的系列化合物。目前对2,5-二芳基乙炔基噻吩为光敏剂的光活化诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系(简称SL细胞系)死亡的机制尚不清楚。本文研究比较了它们对SL细胞的毒杀活性,以SL细胞为供试细胞,对2,5-二芳基乙炔基噻吩光处理后诱导细胞死亡机制进行初步的研究,为2,5-二芳乙炔基噻吩类化合物更深入的研究提供了更多的理论依据,为更合理、更有效地使用2,5-二芳乙炔基噻吩类作为光活化杀虫剂提供指导。 通过四唑盐比色实验(MTT)法,测定了系列化合物对SL细胞的IC50,测量了系列化合物单线态氧产量,发现对SL细胞活性最好并且单线态氧产量最高的是2,5-二芳基乙炔基噻吩(Ⅱ 3),其24h和48h的IC50分别为:0.16μg/ml和0.08μg/ml,单线态氧产量为0.86μg。荧光酶标法通过检测2,5-二芳基乙炔基噻吩在SL细胞内的时间浓度分布,结果表明Ⅱ3在进入SL细胞内的速率跟加入细胞的初始浓度相关,在低浓度下,4到8h药物进入细胞速率较快,更长时间的培养也可以使细胞内药物浓度增加。在较高浓度下,在4-8h内达到高峰,更长时间的培养并不能使细胞内药物浓度增加。用流式细胞仪检测到2,5-二芳基乙炔基噻吩光活化激活后,SL细胞内活性氧水平升高及线粒体膜电位值下降,及检测到2,5-二芳基乙炔基噻吩光活化后对SL细胞产生的细胞凋亡作用,发现较低浓度2,5-二芳基乙炔基噻吩处理的SL细胞主要通过凋亡导致细胞死亡,在高浓度通过细胞坏死导致细胞死亡。用透射电镜观察了2,5-二芳基乙炔基噻吩光活化后对SL细胞膜及其细胞器的损伤。 研究了不同剂量长波紫外光(UVA)(峰值在365nm)对SL细胞活力的影响及其机理。四唑盐比色实验(MTT)法测定UVA对离体培养的SL细胞的细胞毒力;流式细胞术检测UVA处理后SL细胞内活性氧水平和线粒体膜电位变化;1%琼脂糖凝胶DNA电泳检测UVA处理后SL细胞DNA损伤情况。48KJ/m2剂量UVA处理细胞后,细胞增殖抑制率明显上升,且增殖抑制率与UVA剂量呈正相关。12KJ/m2UVA处理后2h细胞内ROS水平显著升高,且与UVA剂量呈正相关。与2h相比,相同剂量UVA处理后24h和48h的ROS水平有所降低。在144KJ/m2剂量UVA处理下,细胞线粒体膜电位呈降低一恢复一再降低趋势。DNA琼脂糖凝胶电泳表明,不超过144KJ/m2剂量UVA对细胞DNA不出现细胞凋亡典型症状的DNA ladder。24KJ/m2UVA是进行SL细胞光活化研究的最佳实验剂量。论文中2,5-二芳基乙炔基噻吩类光活化化合物的单线态氧产量的测量、对SL细胞活性及对细胞损伤机理的研究有助于此系列化合物作为光活化农药应用于农业害虫防治;论文中UVA对SL细胞损伤研究中,得到了光活化活性化合物筛选系统中最佳光照剂量的重要参数,进一步完善了光活化细胞生测体系。
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