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目的:胰腺癌是一种恶性度极高的消化系统肿瘤之一，具有进展快、不宜早期发现和诊治，导致临床有效率和预后极差。由于胰腺解剖位置、胰腺癌生物学习性、早期缺乏明显的临床特异症状、体征，并且缺少简便可靠的早期诊断手段，极易侵犯周围组织器官及远处转移，临床确诊时已属晚期，因此，不能早期诊治，预后差，严重影响患者生命。为此，研究者通过大量临床研究表明，早期治疗以手术切除为主，同时联合化疗、放疗及免疫治疗等的综合治疗，以期达到早期诊治、提高疗效，延长无病生存期等方面，起到了一定的作用。 随着国内外学者对癌症的分子、细胞诱因的不断发现和认识，癌细胞的异常特征能被发现，为癌症靶点治疗提供了理论依据。其中人表皮生长因子受体1(EGFR、HER-1、Erbb-、v-erb-b2erythrobl-astic leukemiaviral oncogene homolog1)，是一种在癌细胞中被频繁异常调节的跨膜糖蛋白，分子量为170KD，由一个胞外区，一个疏水跨膜区域和一个含酪氨酸激酶结构域的胞内区组成。胞外区为EGF提供配体结合区，并转化生长因子-a(TGF-a)，当细胞间域在配体结合时被激活，EGF介导的酪氨酸激酶信号传导通路打开。通常在正常组织和恶性肿瘤组织里都有表达，参与细胞的信号传导。研究文献已证实在胰腺癌中EGFR存在过表达，与疾病的预后、生存率较低以及复发转移相关[1]。已知西妥昔单抗是一种针对EGFR的特异性单克隆抗体，可与表皮生长因子、转化生长因子α竞争性结合多种肿瘤细胞表面的EGFR，从而阻断EGF、TGF-α等配体对EGFR的酪氨酸磷酸化作用，抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。临床上已广泛应用西妥西单抗治疗K-RAS野生型的转移性结直肠癌和头颈部恶性肿瘤，并取得较好的疗效[2-4]。我们推测抑制表皮生长因子受体的信号传导通路是治疗胰腺癌的新方法，因此，本课题拟通过MTT和流式细胞技术方法，应用西妥昔单抗对人胰腺癌细胞的抗肿瘤作用及信号通路机制进行研究，为西妥昔单抗在胰腺癌的临床应用奠定基础。 方法:1应用MTT方法，对人胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1，分别应用西妥昔单抗在不同浓度(12.5ug/ml，25ug/ml，50ug/ml，100ug/ml)，不同作用时间(24h、48h、72h)时的抗肿瘤作用探讨。用显微镜观察西妥昔单抗干预后胰腺癌细胞形态学改变，测得西妥昔单抗对胰腺癌细胞株抑制率;应用流式细胞技术同样检测西妥昔单抗对胰腺癌细胞株细胞周期、凋亡的影响。 2通过Western Blot方法，应用最佳作用浓度和作用时间西妥昔单抗对人胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1的Wnt/β-catenin、EGFR信号通路中的关键蛋白EGFR、β-catenin进行检测，探讨西妥昔单抗抑制胰腺癌细胞增殖转移的可能机制。 结果:1MTT方法检测西妥昔单抗对人胰腺癌细胞株的抑制率:不同浓度西妥昔单抗24小时作用胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1抑制率分别为70.9％、86.6％、114.9％、142.4％和53.9％、65.9％、99.4％、108.3％;48小时作用胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1抑制率分别为-22.8％、7.3％、54.2％、63.1％和-14.3％、26.7％、60.8％、76.3％;72小时作用胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1抑制率分别为-14.2％、26.7％、60.8％、76.3％和-20.0％、1.8％、40.0％、61.8％;得出:随着西妥昔单抗12.5ug/ml，25 ug/ml，50ug/ml，100ug/ml浓度的增加，胰腺癌细胞株抑制率增高;随着不同作用时间24h，48h，72h，显示24小时最高抑制率。得出:西妥昔单抗在100ug/ml、24小时对胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1最高抑制率，应用此药物浓度和作用时间进行后续机制研究。 流式细胞技术检测结果显示，胰腺癌细胞SW1990、PANC-1经西妥昔单抗100ug/ml处理24小时后，收集细胞。给予PI染色，流式细胞仪检测。结果显示西妥昔单抗组G0/G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少，提示西妥昔单抗可通过改变细胞周期抑制细胞增殖。 2应用Western Blot方法，检测西妥昔单抗100ug/ml、24小时干预胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1后，β-catenin、EGFR蛋白的表达水平均明显低于对照组，提示西妥昔单抗可能通过抑制β-catenin、EGFR蛋白阻断Wnt/β-catenin、EGFR，抑制胰腺癌细胞株的增殖。 结论:1西妥昔单抗最佳作用浓度和作用时间:在100ug/ml、24小时对胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1最高细胞抑制率。 2西妥昔单抗100ug/ml、24小时干预胰腺癌细胞株后，抑制人胰腺癌细胞SW1990、PANC-1细胞增殖，表明其机制可能为抑制Wnt/β-catenin、EGFR信号通路。