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草本刺嫩芽(Aralia continentalis,kitag)为五加科多年生草本植物,学名:长白楤木,又名东北土当归、土当归、舌秸颗、狗苦龙芽、牛尾大活等,其嫩芽是著名的营养丰富的名贵珍稀食用山野菜,野生草本刺嫩芽多生于针阔混交林、杂木林、山坡灌丛间。草本刺嫩芽的根、叶、花含挥发油,其中根含2%,叶含0.58%;叶和茎含有黄酮、香豆素,根、茎含有皂甙;茎皮含有单宁;根还含有淀粉19.4%,可溶糖1.69%等;果实含有嘌呤等。根及根皮入药,味辛、苦,性温,无毒,主治风湿性关节炎、腰肌劳损等病。(刘兴权,2001)本实验用热水浸提、酶法处理、再经醇析、Sevage法除蛋白,水相透析得到半精品多糖。脱蛋白后的半精品多糖先经DEAE-纤维素柱层析洗脱,得到脱色的精品多糖,再经SephadexG-200葡聚糖凝胶柱层析洗脱后,得到四种分子量均一的纯多糖,并根据提取部位不同分别命名为:根(sub-G<,NaCl>)、茎(sub-J <,H<,2>O>)茎(sub-J <,NaCl>)、叶(sub-Y<,NaCl>)。应用红外光谱和高效液相色谱分析其组成成分,采用物理化学分析方法验证其理化性质,并证实了草本刺嫩芽多糖具有抑菌作用和抑制RNase的生物学活性。本实验的主要结论如下:
1.采用水提醇沉法提取粗多糖,正交实验得出最佳提取条件为:料液比1:24,温度90℃,时间2h,提取次数2次,此条件下粗多糖含量为3.76%。
2.采用酶法配合水提醇沉法提取草本刺嫩芽粗多糖:本实验应用纤维素酶液处理脱脂后的草本刺嫩芽全株干粉,发现当酶浓度达到7%,温度达到50℃,时间为60min,pH为5.0时,多糖含量可达到4.32%,要比常规法得率高出15%。
3.所提根、茎、叶三部分粗多糖的蛋白质含量分别为:根中蛋白质含量为37.56mg/mL,茎中蛋白质含量为55.73mg/mL,叶中蛋白质含量为16.61mg/mL。物化性质表明,草本刺嫩芽多糖为水溶性的无味粉末。斐林试剂反应,糖醛酸检测和seliwanoff反应均显阳性,碘-碘酸钾反应中只有根多糖显阳性。
4.将三部分脱蛋白多糖进行DEAE-纤维素柱层析,每部分分别用蒸馏水、0.2mol/LNaCl和0.5mol/L的NaOH洗脱,得到的九种级分可作为SephadexG-200样液。经SephadexG-200进一步纯化,得到含量较多,峰形均一对称的四种亚级分:根(G<,NaCl>)、茎(J<,H<,2>O>)、茎(J<,NaCl>)、叶(Y<,NaCl>),通过SephadexG-200凝胶过滤法和醋酸纤维薄膜电泳法进行纯度鉴定,证明为均一多糖。
5.红外光谱分析显示四种纯多糖不含硫酸基团和乙酰基,具备β-糖苷键以及糖类特征吸收峰。HPLC分析得出:根的NaCl洗脱多糖组分为D-半乳糖醛酸、D-果糖、D-葡萄糖,茎的水洗脱液多糖组分为D-甘露糖、D-半乳糖醛酸,茎的NaCl洗脱多糖组分D-葡萄糖、D-半乳糖,叶的洗脱多糖组分为D-半乳糖醛酸和D-山梨糖。
6.三部位多糖的性质研究:抑菌试验显示草本刺嫩芽多糖对青霉菌具有抑制作用;多糖对核糖核酸酶的抑制作用实验表明,草本刺嫩芽的叶多糖成分可以较显著的抑制核糖核酸酶的活性。