论文部分内容阅读
目的:观察医用臭氧对膝关节骨关节炎滑膜IL24与CXCL13表达的影响,探讨臭氧是否通过影响滑膜组织中IL24与CXCL13表达起到治疗骨关节炎的作用,为医用臭氧治疗膝关节骨关节炎提供更多临床依据。 方法:根据纳入标准和排除标准选择骨关节炎患者的滑模标本,随机抽签分为臭氧联合关节镜组和单纯关节镜组,其中臭氧联合关节镜组关节镜手术后关节腔内注射40μg/ml浓度医用臭氧40ml/周,共两周;单纯关节镜组患者术后不注射臭氧,术后第6个月再次进行手术获取检测标本,采用免疫组织化学法、反转录PCR法、蛋白印迹法比较两组关节滑膜治疗前后IL24与CXCL13表达的差异;为验证臭氧对滑膜炎症确有治疗效果,进一步培养人正常滑膜细胞并通过致炎性细胞因子TNF-α刺激建立滑膜细胞炎症模型,使用臭氧化的PBS缓冲液浸洗细胞炎症模型模拟临床臭氧治疗过程,采用免疫细胞化学法、反转录PCR法、蛋白印迹法比较两组滑膜细胞臭氧处理前后IL24与CXCL13表达的差异。 结果:⑴膝关节骨关节炎患者滑膜组织IL24与CXCL13表达量与病情严重程度呈负相关:两组患者共55例(失访1例)60膝,对治疗前关节滑膜组织进行IL24与CXCL13的RT-PCR检测,结果显示随病情加重其mRNA表达量明显降低,免疫组化和蛋白印迹法检测蛋白表达变化趋势与PCR结果一致。⑵治疗后滑膜组织IL24与CXCL13表达水平上升:两组患者经治疗后采用反转录PCR、免疫组化和蛋白印迹法检测其滑膜组织IL24与CXCL13表达量,结果显示治疗后两组患者滑膜中IL24与CXCL13表达量均有不同程度的回升,且臭氧联合关节镜组回升程度较单纯关节镜组显著,差异有统计学意义。⑶人正常滑膜细胞炎症模型建立:通过TNF-α刺激人正常滑膜细胞并用ELISA法检测细胞培养液中IL1β和IL10含量和在显微镜下动态观察细胞生长状态,发现300ng/mL浓度的TNF-α显示较好的致炎作用,细胞培养液中IL1β和IL10的含量随TNF-α刺激时间延长而增多,说明滑膜细胞炎症模型成功建立。⑷人正常滑膜细胞炎症模型中IL24与CXCL13表达量高于正常细胞:通过TNF-α刺激人正常滑膜细胞后采用反转录PCR、免疫细胞化学和蛋白印迹法检测滑膜细胞IL24与CXCL13表达量,结果显示300ng/mL浓度下IL24与CXCL13表达量随TNF-α刺激时间延长而升高,与正常滑膜细胞相比差异有统计学意义。⑸臭氧化PBS缓冲液浸洗滑膜细胞炎症模型后IL24与CXCL13表达量降低:臭氧化的PBS浸洗滑膜细胞炎症模型后采用反转录PCR、免疫细胞化学和蛋白印迹法检测滑膜细胞IL24与CXCL13表达量,结果显示处理后的表达量较处理前有明显降低,与用普通PBS浸洗的滑膜细胞炎症模型组相比差异有统计学意义。 结论:①医用臭氧对膝关节骨关节炎有较好的临床治疗效果,能够减轻骨关节炎症状,延缓滑膜炎的进展,但不能完全停止和逆转骨关节炎病程进展。②医用臭氧可以通过改变IL24与CXCL13表达达到治疗膝关节滑膜炎的作用。③医用臭氧联合关节镜治疗骨关节炎较单纯关节镜清理术效果更好。