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2002-2003 SARS(Severe acute respiratory syndrome)暴发于我国广东省境内，并在极短的时间内传向世界各地。经证实SARS病原为一种新的冠状病毒(coronavirus，CoV)，命名为SARS-CoV。尽管SARS被成功的控制，仍然没有有效的抗SARS-CoV药物和疫苗用于预防可能的SARS-CoV或类似病毒如蝙蝠SARS样冠状病毒(SARS-like CoV， SL-CoV)的再次暴发。因此，建立安全有效的SARS-CoV或SL-CoV体外研究系统是必要的。本文主要开展了以下两个方面的工作：
1.在缺失E基因的SARS-CoV全长感染性克隆r-SARS-CoV-AE的基础上，进一步缺失S基因并用eGFP标签基因进行替换，成功构建了SARS-CoV的安全型复制子。实验证明，所构建的安全型复制子能够在真核细胞内完全独立的完成转录和复制，并表达eGFP标签。转录抑制实验说明，SARS-CoV的转录复制能够被半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64D显著抑制，并表现为eGFP信号的减弱；同时Ribavirin处理的对照组荧光信号则正常表达。此外，在该复制子中对非结构蛋白基因nspl，nsp2和nsp16进行了缺失，确认了nspl和nsp2为SARS-CoV RNA复制的非必须基因，nsp16为必须基因。上述结果说明该复制子可以用于SARS-CoV或类似病毒的抗病毒药物筛选和复制酶功能的研究。
2.蝙蝠被证明为SARS样冠状病毒(SARS-like CoV， SL-CoV)的自然宿主。来源于菊头蝠的SL-CoV Rp3株，是目前最接近人SARS-CoV的一株。本文在SARS-CoV全长感染性克隆r-SARS-CoV-AE的基础上，通过反向遗传学(ReverseGenetics)技术构建了含有Rp3 S基因的重组SARS-CoV感染性克隆。转染实验证明，重组克隆能够在转染细胞中正常转录和复制，并表达Rp3 S蛋白和SARS-CoV的N蛋白。但该重组感染性cDNA克隆不能在Vero E6细胞中的被拯救，进一步证明Rp3 S不能够利用人ACE2作为功能受体。