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目前国内用于免疫马匹制备马抗狂犬病血清的抗原一般是人用狂犬病疫苗。随着人用狂犬病疫苗的发展,细胞培养疫苗包括地鼠肾细胞疫苗、Vero细胞疫苗等代替了脑组织疫苗。由于细胞培养疫苗在生产过程中使用了人白蛋白作保护剂,不仅提高了抗原成本,更重要的是人白蛋白能诱导非特异性免疫反应,因此不能直接作为免疫马匹的抗原。为了提高抗原质量,降低生产成本,我们对用Vero细胞制备马抗狂犬病血清的抗原进行了研究。首先,将Vero细胞和狂犬病毒aG株均用含马血清的培养液进行驯化,使之适宜在含马血清的培养液中培养和繁殖,进一步提高了疫苗的质量和稳定性。然后通过多次试验,确定了用驯化的Vero细胞生产狂犬病毒的适宜条件,从而制备出具良好抗原性的、不含人体成分（人白蛋白）的质量稳定的新型马用狂犬病毒抗原。 试验结果显示,Vero细胞能较快适应马血清,仅连续传代3代次,其生长状况同常规小牛血清培养就基本一致。为了获得高滴度的病毒,我们对毒种aG株预先作了适应性培育。将毒种用马血清在Vero细胞上连续传18代,获得病毒滴度稳定在7.0logLD50/mL左右的毒种;并根据《中国生物制品规程》2000年版规定,对用含马血清营养液驯化获得的Vero细胞和狂犬病毒作了检测,均符合制备抗原要求。 在病毒感染与增殖方面,试验表明在细胞生长对数期感染复数为0.001-0.1MOI较适宜。以该浓度接种病毒,收获病毒的滴度可在6.5logLD50/mL以上。在维持液中马血清含量在1%-3%范围内,感染后5-8天的病毒滴度均在7.17logLD50/mL以上,第11天时病毒滴度仍能达到6.5logLD50/mL;病毒增殖高峰为5-8天,病毒复制可持续20天以上。 试验还发现,接种病毒后,维持液PH值下降较快,影响后期的病毒增殖。如果在种毒第三天用将PH调至7.6左右,可将第5天和第8天收获的病毒滴度提高。 依据以上条件我们试制了3批抗原,在细胞生长对数期以毒力为7.5logLD50/mL的毒种,0.01MOI感染细胞,并使用用含1%马血清的维持液,置