Apoptin/VP3(凋亡素)是一种来源于鸡贫血病毒(CAV)的小分子蛋白,由121个氨基酸构成,其能通过线粒体途径诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,对正常细胞没有毒副作用,其诱导肿瘤细胞选择性凋亡并不依赖p53途径,不受抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl的调节,但其作用机制尚未完全阐明。　　前期实验室课题组以His-Apoptin融合蛋白诱饵,通过pull-down技术获得可能与Apoptin相互作用蛋白多种,包括 HSPA9,GRB10,GRB14,CDK5RAP3,TNFAIP1等。其中HSPA9已经被验证其在HepG2细胞中能与Apoptin蛋白发生其相互作用关系,并影响其特异性诱导肿瘤细胞凋亡效应。　　目的：　　通过研究GRB10/CDK5RAP3与Apoptin在HEK293T细胞中的相互作用,为Apoptin相关蛋白研究提供可能的线索,从而为Apoptin的选择性诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究提供可能的目标蛋白。　　方法：　　通过分子克隆技术,构建带有-HIS标签的GRB10和CDK5RAP3的真核表达载体,经酶切、测序鉴定后,将其与已经构建好的HA-Apoptin质粒通过脂质体共转染入HEK293T细胞,然后提取细胞蛋白,通过免疫共沉淀技术,免疫印迹技术,检测GRB10/CDK5RAP3是否与Apoptin在HEK293T细胞中发生相互作用。　　结果：　　我们成功构建了带-HIS标签的GRB10和CDK5RAP3真核表达载体。并将其单独转染和其与Apoptin质粒共转染于 HEK293T细胞中均获得了表达。共转染细胞后,蛋白进行免疫共沉淀和免疫印迹,结果表明,在HEK293T细胞中GRB10和Apoptin蛋白可能不存在直接的相互作用。在HEK293T细胞中同样也未观察到CDK5RAP3和Apoptin的相互作用。　　结论：　　1.在HEK293T细胞中,GRB10与Apoptin可能不存在直接的相互作用。　　2.在HEK293T细胞中,CDK5RAP3与Apoptin可能不存在直接的相互作用。