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本文研究了还原型谷胱甘肽(reducedglutathione，GSH)对奥尼罗非鱼(OreochromisniloticusxO．aureus)幼鱼生长与免疫性能的影响。通过生长试验、电生理试验和离体细胞培养试验探讨了GSH对罗非鱼生长及免疫性能的调节机理。旨在为生物活性肽作为绿色添加剂在水产养殖中的应用提供理论根据。
在生长试验中，以不添加GSH的纯化饲料为对照组，分别在对照组饲料的基础上添加100、200、400、2000mg／kg的GSH，对平均体重为3．09g的奥尼罗非鱼幼鱼进行8周的饲养试验，研究GSH对罗非鱼幼鱼生长、饲料效率、体成分、激素分泌以及免疫性能的影响。每个饲料组设三个重复水族箱，每箱随机放养30尾鱼。饲养试验结束后采样并测定各项指标。结果显示：各饲料组罗非鱼的肥满度、体成分、饲料效率、蛋白质效率比、头肾指数、脾脏指数以及血清、肝脏、背肌、全肠中GSH含量、各组血清与全肠中MDA含量、血清T3含量、肝组织中GSH-PX活力、血液中白细胞对嗜水气单胞菌的吞噬率(PP)、吞噬指数(PI)均没有显著性差异(／>0．05)；2000mg／kg组罗非鱼的特定生长率显著高于对照组(P<0．05)：100mg／kg组血清中IGF-I含量显著高于400mg~g组(P<0．05)，lOOmg／kg组血清中IGF-I含量高于对照组，但差异不显著(P>0.O5)；400rang组和2000mg／kg组血清中GSH-PX活力显著高于200mg/kg组(P<0．05)；血清中GR水平lOOmg／kg显著高于对照组以及其它实验组(P<0．05)，400rog／kg组显著高于200、2000mg/kg组(P<0．05)。在肝组织中，2000mg／kg组与400rog／kg组MDA含量显著高于对照组与200rog／kg组(P<0．05)。结果提示，在饲料中添加一定量的GSH能提高罗非鱼幼鱼的特定生长率、饲料效率及蛋白质效率比；促进IGF-I的分泌；提高罗非鱼血清中GSH-PX、GR的活力，提高肝组织中GR的活力，降低肝组织中MDA含量，从而增强罗非鱼机体抗氧化能力。
在离体试验中，本文研究了在离体情况下谷胱甘肽(GSH)对罗非鱼幼鱼头肾巨噬细胞免疫功能的影响。本实验利用percoll梯度离心法分离得到罗非鱼头肾巨噬细胞，在96孔板中进行接种培养，接种密度为2xl07个／mL，置于28~C、饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养2h后换上新的培养液，并在培养液中添加GSH使其终浓度为别为0、0．003、0．008、0．017、0．033、0．083、0．167、0．333、0．833、1．667、3．333、8．333、16．667、33．333、83．333、166．66mg／L，培养24h后，利用氯化硝基四氮唑兰(Nitrobluetetrazolium，NBT)还原法测定巨噬细胞的呼吸爆发活力；另外，在培养液中添加不同的剂量的GSH，使其终浓度分别为0、3．333、8．333、16．667、33．333、83．333mpdL，培养24h后，利用反复冻溶法制作细胞裂解液，测定裂解液中酸性磷酸酶(ACP)的活性，旨在以巨噬细胞内溶酶体标志酶(ACP)的活性来反映巨噬细胞的活力(李亚南，2000)。结果表明：培养液中16．667mg／L的GSH对巨噬细胞的呼吸爆发过程02产率有显著的促进作用(P<0．05)；添加GSH后，罗非鱼巨噬细胞的ACP活性没有显著变化(P>0．05)。说明体外添加适量的GSH可以提高罗非鱼头肾巨噬细胞的呼吸爆发活力，参与免疫调节，但是对罗非鱼头肾巨噬细胞内ACP活性无显著性影响。
在电生理试验中，通过记录奥尼罗非鱼嗅上皮产生的嗅电图(electro-olfactogram，简称EOG)反应，以L谷氨酸为参照，研究了几种小肽(包括GSH、丙谷二肽、肌肽、双甘氨肽、阿斯巴甜)以及几种蛋白酶解物(包括鱼粉酶解物、两种大豆酶解物)对罗非鱼嗅觉反应的影响。结果表明：罗非鱼嗅电图是一个单相负电位。当用水刺激嗅囊的时候，没有电位产生。随着刺激浓度的升高，EOG反应幅值呈对数上升，而且在本试验中的刺激浓度范围内EOG反应幅值没有没有出现一个平稳值。在小肽的试验中发现，罗非鱼嗅囊在受到GSH刺激的时候产生的EOG反应最强烈，在刺激浓度为2mM时，GSH引起的EOG反应反应幅值显著大于其它四种小肽(尸<0．05)；在浓度为5、10mM时差异极显著(尸<0．01)；其余的四种小肽在同一浓度下引起的EOG反应反应幅值差异不显著(尸>0．05)。在酶解物的试验中发现，在同一刺激浓度下，鱼粉酶解物引起的EOG反应反应幅值比其它两种大豆酶解物的要大，在刺激浓度为50、200mffL时差异显著(尸<0．05)；而在同一浓度下两种大豆酶解物刺激产生的EOG反应幅值差异不显著(尸>0．05)。结果揭示生物活性肽对罗非鱼有嗅觉刺激作用，与其它小肽相比，罗非鱼嗅囊对GSH的刺激反应更强烈。在三种蛋白酶解物中，鱼粉酶解物对罗非鱼嗅囊EOG反应的刺激较为强烈。
以上结果提示了GSH对罗非鱼的生长性能有促进作用，其机理可能是：①GSH促进鱼体IGF-1分泌，调节鱼的生长。②GSH通过刺激罗非鱼产生嗅觉刺激而产生诱食作用，从而促进生长。③GSH可以通过细胞免疫途径提高罗非鱼机体免疫机能。④GSH可以提高鱼体内抗氧化水平，免除或减轻自由基对鱼体的损伤。