ABF/AREB(ABRE-binding facto/ABA-response element binding factor)蛋白是广泛存在于植物中的一类转录因子,属于bZIP类转录因子的A亚族,主要在植物生长发育等方面具有重要的作用。本研究从刚毛柽柳(Tamarix hispida)转录组数据中鉴定出一条可能与盐胁迫应答相关的ABF基因,命名为ThABF2,该基因开放读码框(ORF)全长1110 bp,编码370个氨基酸,相对分子质量82.3kDa,理论等电点(PI)为5.02。构建pBI121-GFP-ThABF2载体,亚细胞定位结果表明ThABF2蛋白定位在细胞核中。构建pGBKT7-ThABF2载体,转化Y2H酵母感受态细胞,通过SD/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal培养基筛选检测显示ThABF2转录因子具有转录激活活性。为了研究ThABF2基因的耐盐功能,构建了重组pROKⅡ-ThABF2和pFGC5941-ThABF2基因,进行刚毛柽柳瞬时转化以获得瞬时过表达和抑制表达ThABF2基因刚毛柽柳苗,同时以pROKII瞬时侵染刚毛柽柳作为对照。在NaCI胁迫下,分析比较三种转基因刚毛柽柳中的组织染色和生理指标进行测定ThABF2基因的功能。结果表明,盐胁迫后过表达株系的染色最浅,抑制表达株系的染色最深。过表达植株的H2O2含量、MDA含量和离子渗透率相对最低,IE植株的含量最高;但过表达植株的POD活性和SOD活性和叶绿素含量相对最高;IE植株的含量相对最低。以上研究结果表明,ThABF2基因能够提高转基因刚毛柽柳POD和SOD活性,降低细胞内H2O2和O2-含量。表明过表达ThABF2基因可能提高转基因刚毛柽柳的耐盐能力。为了进一步验证瞬时侵染的结果,将pROKII-ThMBF2基因转入野生型拟南芥,筛选获得T3代纯合株系。与野生型拟南芥进行NaCI胁迫,分析比较盐胁迫前后转基因和对照拟南芥的生长指标,结果显示盐胁迫后过表达株系的种子萌发率、根长和鲜重都明显高于对照,长势也优于对照。进一步分析比较盐胁迫前后转基因及野生型对照株系的组织染色和生理指标,结果显示与瞬时转化刚毛柽柳结果一致,盐胁迫后转基因拟南芥株系的染色更浅,过表达植株(OE)的H202含量、MDA含量和离子渗透率相对最低,但POD活性和SOD活性和叶绿素含量相对最高。表明ThABF2基因能提高转基因拟南芥的耐盐性。利用TF-Centered YIH技术(以转录因子为中心的酵母单杂交技术)鉴定了ThABF2转录因子可能识别的顺式作用元件,并通过酵母单杂交方法进行验证。结果显示,ThABF2基因可以特异性识别“CGTAAT”序列,为进一步研究其下游调控的靶基因及调控机制奠定基础。