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J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus,ALV-J)是90年代初从商品代肉鸡中分离鉴定出来的新的亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV),我国于1999年首先在肉用型鸡群分离鉴定出ALV-J毒株。近十几年来,我国各地不断有鸡群感染ALV-J的相关报道,J亚群禽白血病已给我国的养禽业带来了巨大的经济损失。
为了解目前广东地方品系鸡中ALV-J的流行状况,本研究对2009-2010年送检的疑似J亚群禽白血病感染的临床样品进行处理后,通过接种DF-1细胞培养、ALV p27抗原检测、聚合酶链式反应(PCR)以及间接免疫荧光试验(IFA)进行了病毒分离鉴定。结果显示从中分离鉴定出4株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为:GD0911、GD0610、GDl209-1和GDl209-2,并通过分段扩增的方法,完成了各分离株的前病毒基因组DNA序列测定,GD0911、GD06lO、GD1209-1和GD1209-2前病毒全基因组长度分别为7717bp、7645bp、7730bp和7490bp。全基因组序列分析结果表明,所有分离株在基因组结构上均符合典型的复制完全型反转录病毒的特点,均没有原癌基因的插入。
将分离鉴定的4个毒株的gp85核苷酸序列与国内外各参考毒株相同区域核苷酸序列进行同源性分析,结果显示各分离株gp85基因间的序列同源性在94.4％～97.0%之间;各分离株gp85核苷酸序列与J亚群原型株HPRS-103的相应核苷酸序列同源性在94.6%～96.0%之间,各分离株gp85核苷酸序列与广东分离株ZH-08、SCAU-0901、SZ-08、XX1-09、XX2-09和XG-09的相应核苷酸序列同源性在92.90%～97.1%之间。U3区核苷酸序列同源性分析表明,各ALV-J分离株U3序列的同源性在90.2%～09.5%之间,其中GD0610与GDl209-2之间的同源性高达99.5%。与ALV-J原型株HPRS-103的U3区核苷酸序列同源性在93.0%～94.2%之间,血管瘤GD0610株与各ALV-J参考株的U3区核苷酸序列同源性在89.8%～94.4%之间。
为了解广东地方品系鸡麻鸡自然感染ALV后抗体反应和带毒排毒的规律,以便为制定鸡群中ALV-J感染的预防控制措施提供可靠的流行病学依据,本研究通过动物实验,在16周内对自然感染ALV的麻鸡病毒血症、泄殖腔排毒及抗体反应进行动态检测。结果如下:
1.经DF-1细胞培养、ELISA ALV p27抗原检测、特异PCR和间接免疫荧光试验(IFA)等方法证实自然感染ALV的麻鸡存在ALV-J和ALV-BD的混合感染,但主要以ALV-J感染为主。
2.自然感染ALV的麻鸡在1日龄的胎粪中检测不到ALV p27抗原,随着日龄的增加,泄殖腔中的ALV p27抗原阳性率呈上升趋势,在84日龄时ALV p27抗原阳性率上升最高值75.25%(76/101)。
3.随着日龄的增加,麻鸡病毒血症的阳性率在28日龄时即上升的最高值57.43%(58/101),之后下降趋于平缓,到91日龄时病毒血症的阳性率又重新上升到最大值57.43%。
4.麻鸡ALV-J特异性抗体在1～28日龄逐渐消失。随着日龄的增加,ALV-J特异性抗体的阳性率呈上升趋势,到105日龄时ALV-J抗体阳性率达到最高值75.25%(76/101)。ALV-AB特异性抗体在28日龄时检测呈阴性,随着日龄的增加,ALV-AB特异性抗体阳性率逐渐上升,84日龄时抗体阳性率达到最大值27.72%(28/101),随后又开始下降。
5.自然感染ALV的麻鸡呈现了多种感染型,14日龄时感染主要呈V-A-S+,14～63日龄时感染逐渐转变为免疫耐受性感染(V+A-),77～112日龄时感染主要呈现为有抗体的感染型(V-A+和V+A+)。