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目的：利用肠道病毒71型-柯萨奇病毒A组16型(EV71-CA16)联合灭活疫苗,对动物体内和体外的保护效果进行研究。尝试用致敏的T淋巴细胞通过腹腔过继回输的方法建立过继免疫乳鼠模型,对细胞免疫反应与保护作用之间的关系进行探索性研究。方法：用Vero细胞培养疫苗候选株EV71-KM和CA16-KM,病毒收获后经β-丙内酯灭活,A1(OH)3佐剂吸附,制成实验性疫苗。实验性疫苗分别于第0和14天经肌肉注射免疫8周龄ICR雌鼠,100μ1/只,联合免疫组免疫剂量分为：EV71 256EU+CA16 32EU组、EV71 256EU+CA16 320EU组与EV71 256EU+CA16 960EU组,对照组注射等体积PBS,第一次免疫后1h与雄鼠合笼,随其交配,分娩后24h内采集母鼠和乳鼠的血液用于血清中和抗体滴度的检测；同时用100LD50强毒株(EV71-CC, CA16-CC)经颅内注射进行攻毒,连续21天观察其临床症状与死亡情况,评价联合疫苗对乳鼠的保护作用。用CA16-KM灭活疫苗(抗原含量为32EU/100μl)经腹腔注射免疫1日龄SPF级ICR乳鼠2次,间隔2周,40山/只,对照组注射等体积PBS,末次免疫后第7天,以安乐法处死小鼠,无菌条件下取出脾脏,分选脾脏单个核细胞、T细胞、B细胞、记忆性T细胞、效应性T细胞,将分选的细胞经腹腔注射回输1日龄乳鼠,回输2h后用强毒株(CA16-CC)经颅内注射攻击,连续21天观察其临床症状与死亡情况,评价细胞免疫反应与保护作用之间的关系。结果：各实验组未检测到血清特异性中和抗体；EV71-KM灭活疫苗和CA16-KM灭活疫苗之间没有交叉保护作用。两种疫苗单独免疫雌鼠能够完全保护其新生乳鼠抵抗相应病毒致死剂量的攻击；联合免疫时,EV71 256EU+CA16 32EU剂量组,对EV71的保护率为100%,对CA16的保护率及EV71和CA16同时攻毒的保护率为0%； CA16免疫剂量提高到320EU时,对EV71和CA16同时攻毒总的保护率为30%；对EV71的保护率为100%,对CA16保护率为67%。CA16免疫剂量提高到960EU时,对两个病毒同时攻击的保护率为70%,对EV71和CA16分别攻击的保护率均达到100%,,对照组的保护率为0%。CA16灭活疫苗免疫组小鼠脾脏单个核细胞以2×107/只回输ICR乳鼠,对CA16攻击产生100%的保护；免疫组T细胞以1×107/只回输ICR乳鼠,对CA16攻击产生60%的保护；免疫组B细胞以1×107/只回输ICR乳鼠,对CA16的攻击产生56%的保护；免疫组CD4+T和CD8+T细胞以5.0x106/只回输裸乳鼠、免疫组记忆性T细胞、效应性T细胞以2.0x105/只回输裸乳鼠后对病毒攻击均无保护,对照组对病毒攻击均无保护。结论：EV71-CA16联合免疫动物可诱导产生针对两种病毒的免疫反应。EV71 256EU在与三个CA16不同配比剂量组中均可产生完全保护；CA16低剂量组没有有保护作用,提高剂量后,保护率也提高。致敏的脾脏单个核细胞过继回输至新生乳鼠体内可完全保护其抵抗CA16的攻击。致敏的T细胞、B细胞过继回输至新生乳鼠体内可在一定程度上部分保护其抵抗CA16的攻击。