【摘 要】
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目的:构建靶向树突状细胞(DC)的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21,针对抵抗鼠眼角膜单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的感染,探讨其是否能产生更强的免疫应答反应。方法:通过经典基因克
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目的:构建靶向树突状细胞(DC)的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21,针对抵抗鼠眼角膜单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的感染,探讨其是否能产生更强的免疫应答反应。方法:通过经典基因克隆方法,首先经过限制性内切酶酶切,切除了原先PRSC-gD-IL-21(现存质粒)中gD基因,再通过酶切及连接反应使NLDC145与gD相连克隆至原来gD的克隆位点上,保留原先另一克隆位点IL-21的免疫佐剂的作用,构建靶向DC的重组质粒pRSC-NLDC145·gD-IL-21,对其进行相关鉴定,并和壳聚糖(chitosan)包裹组成纳米HSV DNA疫苗,分别以靶向组pRSC-NLDC145·gD-IL-21 +chitosan、非靶向组 pRSC-gD-IL-21+ chitosan、pRSC+ chitosan 和 chitosan 免疫小鼠 3 次,间隔2周,从而检测各疫苗对小鼠免疫应答的水平及对HSV-1眼部感染的免疫保护反应。结果:靶向DC的重组质粒pRSC-NLDC145·gD-IL-21,经基因测序、酶切鉴定后,序列完全正确;此重组质粒经蛋白印迹方法鉴定,其目的蛋白能在真核细胞内成功表达;且和纳米壳聚糖包裹形成包封率较高的靶向DNA疫苗组,与非靶向组比较,血清中HSV-1病毒中和抗体水平、小鼠泪液中特异性sIgA分泌水平以及CTL、NK细胞杀伤活性程度均明显增高,同时针对HSV-1眼部感染产生了更强的免疫保护反应。结论:成功研制的靶向DC的DNA疫苗pRSC-NLDC145～gD-IL-21,经小鼠眼表粘膜接种后诱导了更强的免疫应答保护反应,同时也间接证明了其目的抗原可最终靶向于DC,为今后该疫苗应用于治疗复发性单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)奠定了坚实的基础。
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