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本研究利用生物分析软件对华南农业大学农业部养禽与禽病防治重点开放实验室分离并保存的NDV分离株GD/GM/03/Ch的血凝素神经氨酸酶蛋白(HN蛋白)进行抗原特性分析，综合考虑和分析蛋白质的柔韧性、表面可能性和亲水性等，设计169～267位氨基酸(HNa片段)、318～405位氨基酸(HNb片段)和448～571位氨基酸(HNc片段)三个细胞抗原表位相对集中的区段作为多肽表位候选区域，并将这三段串联起来设计为覆盖面更广的一个抗原区域(HNa—b—c片段)。设计引物成功对HNa、HNb和HNc这三段区域进行了PCR扩增，通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET32a(+)上，获得重组质粒pET—HNa、pET—HNb和pET—HNc，并且将HNa、HNb和HNc片段与pET32a(+)载体分段酶切连接，获得串联重组质粒pET—a—b—c。对重组质粒进行鉴定并测序确认读框正确后，转入大肠杆菌Rossetta中诱导表达并进行纯化。在IPTG的诱导下，四个融合蛋白都得到大量表达，SDS-PAGE薄层扫描分析表明四个重组蛋白大小依次约为31KDa、30KDa、34KDa和55KDa。Western Blot印迹分析表明，表达产物均能同NDV抗血清发生特异性的反应，四个蛋白均具有较好的免疫反应性。HNa、HNb、HNc及HNa—b—c片段在pET32a(+)表达后，各融合蛋白大部分以包涵体形式存在。由于重组的融合蛋白都带有6×His标签，本研究采用Ni2+螯合柱亲和层析将四个融合蛋白在变性的条件下进行纯化，结果得到较高纯度的蛋白。
用表达的重组蛋白加免疫佐剂制备为油乳剂疫苗后经皮下注射非免疫鸡，免疫两次后可产生水平较高的抗体，且抗体水平均在二免后第14d达到最高。用10个LD50强毒株GD/GM/03/Ch攻击实验鸡，统计其发病率和死亡率，并在攻毒后第3d、5d、7d天采棉拭子检测存活鸡的排毒率。结果显示，重组蛋白免疫组HNa、HNb、HNc和HNa—b—c均能产生保护性中和抗体，对亲本毒株的攻击能提供一定的保护，保护率分别为50％(8/16)、75％(12/16)、62.5％(10/16)、68.75％(11/16)，并可以显著的抑制排毒。结合耐过鸡的排毒率，表明HNb融合蛋白产物的免疫效果相对较好。
设计引物成功扩增NDV的HN基因，并将其克隆到杆状病毒Bac-To—Bac表达系统载体pFastBac TM1上，通过筛选鉴定获得重组质粒pFast—HN。将重组质粒pFast—HN转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTME.coli感受态中进行重组，筛选鉴定获得重组杆粒pFast—HN，通过脂质体Cellfectin，将获取的重组杆粒pFast—HN转染Sf9细胞，使HN蛋白成功进行表达。表达的HN融合蛋白分子量约为62.7KDa，Western blot检测结果表明其能同NDV抗血清发生特异性的反应，表明表达的HN蛋白具有较好的免疫反应原性。
本研究为研究新城疫的抗原免疫机制提供材料，为研发新城疫多表位疫苗奠定基础，同时也为进一步生产NDV检测试剂创造了条件。