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碱性蛋白酶是一类最适pH在9~11的蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶,它不仅能水解肽键,还具有水解酯键、酰胺键和转酯及转肽的功能。碱性蛋白酶在洗涤剂、食品、医疗、酿造、丝绸、制革等行业都有广泛应用。虽然蛋白酶的研究已有多年,但目前蛋白酶制剂品还是主要被国外大公司所垄断,尽管国内企业也有生产但产量低、价格贵等问题导致企业盈利少,因此提高菌株产酶能力和培养工艺优化仍是研究的热点问题。论文所用出发菌株为河南仰韶生化公司的碱性蛋白酶生产菌株,2709碱性蛋白酶菌株。首先对该菌株进行复壮分离,得到F12菌株,酶活达到9796.8U/mL,较原始出发菌酶活8985.6 U/m L提高9%。为得到碱性蛋白酶高产菌株,本实验采用低能离子束基因修饰技术来诱变选育高产菌株。通过对F12菌株进行离子束注入诱变诱变参数优化,结果显示当注入能量为30 Ke V,注入剂量为1×1015 ions·cm-2时诱变效果较好,最后筛选得到碱性蛋白酶高产菌株A3,其酶活为11892.8 U/m L,较原始菌株酶活提高32.4%。将A3菌株进一步做紫外诱变处理,研究表明:在紫外照射120 s、150s时致死率分别达到81.82%、90.91%,在此诱变剂量下筛选出Z26菌株,平均酶活达到13517.7 U/m L,较A3菌株提高13.7%,比出发菌株提高50.4%,连续传代后Z26菌株的酶活力变化在97%-103%之间,表现出较好的遗传稳定性,能够作为工业生产菌株。为提高产量降低成本,以Z26高产诱变菌株为实验菌株,对影响其酶产量的主要发酵条件进行单因素和正交实验优化,实验结果表明,该菌株的最佳发酵条件:豆粕粉添加量为4%,玉米粉添加量为7%,发酵温度为37%,发酵起始pH为7,接种量为7%,发酵时间为36 h。在此条件下进行验证实验,测得Z26菌株发酵后酶活力为13929.7 U/mL,比优化前提高3%。最后对高产菌株的碱性蛋白酶进行初步的酶学研究。研究结果表明:该酶的最适作用温度为37℃,最适作用pH为11,在温度不高于50℃时具有良好的热稳定性,pH在7-11时很稳定,对1 mol/L的H202有一定的耐氧化性,Cu2+几乎完全抑制酶反应;Ca2+、Mn2+可提高酶活力,因此该碱性蛋白酶性能较好,能在工业上广泛应用。