双酶解罗非鱼鱼鳞制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

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我国养殖和加工罗非鱼产量巨大,2012年罗非鱼产量逾145万吨,产生鱼鳞约4.3~7.2万吨,鱼鳞利用的潜力有待挖掘。本论文以罗非鱼鱼鳞为研究对象,鱼鳞经过10%(W/V)的NaCl溶液脱除杂蛋白和鱼银粉、0.4mol/L的HCl溶液脱除钙质无机盐成分获得鱼鳞蛋白质,再根据罗非鱼鱼鳞氨基酸组成特点,采用双酶切技术,利用胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶的酶切位点特异性定向地对罗非鱼鱼鳞进行水解,从而制备高活性的血管紧张素转化酶抑制肽。主要研究内容及结果如下:   1、罗非鱼鱼鳞蛋白质的提纯及成分研究。罗非鱼鱼鳞中无机盐含量高达37.77%,经用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1∶15、时间1.5h处理后降低到1.28%;同时,鱼鳞蛋白质含量从47.63%提高到85.66%。罗非鱼鱼鳞中氨基酸含量高达40.6%,其中芳香族氨基酸和脯氨酸占氨基酸总量的17.14%,疏水性氨基酸和碱性氨基酸占氨基酸总量的51.45%,含有丰富的胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶酶切位点,非常有利于血管紧张素转化酶抑制肽的制备和提取。   2、单因素实验显示,酶解pH、温度、料液比、时间是影响水解度和ACE抑制率的四个主要因素。两种有序双酶解产物水解度分别为20.05%、19.83%,ACE抑制率分别为56.04%、55.84%,差异性不显著。碱性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、两种酶同时参入酶解鱼鳞,产物水解度分别为20.6%、3.5%、20.1%,ACE抑制率分别为31.7%、6.2%、55.91%。结果表明,碱性蛋白酶主要影响鱼鳞的水解度,而胰凝乳蛋白酶的加入明显提高了产物的ACE抑制活性。   根据单因素实验结果,采用碱性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶同时加入的双酶切技术,设计正交实验,得出罗非鱼鱼鳞血管紧张素转化酶抑制肽的最佳提取工艺条件为pH9、温度55℃、料液比4%、时间2h,此时水解度为21.09%、ACE抑制率为57.12%。   3、针对提取的血管紧张素转化酶抑制肽,进行ACE抑制率和抗氧化活性测定,探究其生物活性。研究表明,罗非鱼鱼鳞酶解液原液、10倍浓缩液、100倍浓缩液对ACE抑制率为57.12%、75.63%、96.47%,对DPPH的清除率分别为73.02%、88.26%、94.32%,对ABTS的清除率分别为70.76%、78.94%、89.89%,即分别相当于1.07mmol/L、1.20 mmol/L、1.36 mmol/L的Trolox的抗氧化活性。实验表明,双酶解制备的血管紧张素转化酶抑制肽不仅具备较强的ACE抑制活性,同时抗氧化活性作用突出,是提取降压药的理想来源。   利用鱼鳞制备提取血管紧张素转化酶抑制肽是提高罗非鱼鱼鳞附加值的一个重要方面。
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