目的：1.本研究对中医药联合吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌进行系统评价,以提供扶正抗癌方联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌的研究可行性文献证据。2.本研究对三种NSCLC细胞系(A549、H1650、PC9)进行药物敏感性及信号通路相关的实验,观察扶正抗癌方与吉非替尼联用的作用效果,并探讨其联合作用的机制。方法：1.计算机检索全国图书馆参考咨询联盟(2006.-2012)、中国知网(2006.-2012)、VIP(2006-2012)所收录的相关文献。收集以中医药联合吉非替尼为干预措施治疗非小细胞肺癌的随机对照试验。对纳入研究逐个进行质量评价,采用ReMan4.2.10软件对所提取资料进行Meta分析。2.采用MTT增殖抑制试验,对三种非小细胞肺癌细胞：A549、H1650、PC9进行扶正抗癌方及吉非替尼单药药敏试验并观察其抑制效果。采用流式细胞术,检测扶正抗癌方、吉非替尼以及两药同时使用对三种细胞凋亡的调控作用。3.用扶正抗癌方不同浓度及在不同时间点处理细胞,采用western blot的方法观察不同信号通路中几种蛋白磷酸化的改变情况。用扶正抗癌方、吉非替尼最佳浓度单独使用以及扶正抗癌方和吉非替尼联合使用处理三种细胞,采用western blot的方法观察不同信号通路中激酶蛋白分子磷酸化的改变情况结果：1.检索结果获得84篇文献,最终纳入9项随机对照实验,586例晚期非小细胞肺癌患者。治疗组(中医药+吉非替尼)和对照组(吉非替尼)比较疾病控制率、功能状态改善、皮疹、腹泻、恶心呕吐、肝功能状态,分别进行异质性检验,患者组间差异无统计学意义,进行meta分析相对获益系数(RR)分别为1.18、1.45、1.18、1.31、1.16、1.01。漏斗图分析不存在明显发表性偏倚,但是样本量普遍存在较小的弊端。2.MTT增殖抑制试验结果(1)吉非替尼单独使用时对不同细胞的增殖抑制作用。24H吉非替尼对不同细胞的影响：经两因素方差分析,吉非替尼对不同细胞增殖抑制率差异无统计学意义,F=0.15,P=0.7063。吉非替尼的不同剂量对细胞增殖抑制率差异有统计学意义,F=4.41,P=0.0031。48H吉非替尼对不同细胞的影响：经两因素方差分析,吉非替尼对不同细胞增殖抑制率差异有统计学意义,F=7.57,P=0.0101,对A549细胞较H1650细胞抑制率更为明显。吉非替尼的不同剂量对细胞增殖抑制率差异有统计学意义,F=3.53,P=0.0046,随着剂量的增加,抑制率增加。72H吉非替尼对不同细胞的影响：经两因素方差分析,吉非替尼对不同细胞增殖抑制率差异有统计学意义,F=40.11,P=0.0000,对A549细胞较H1650细胞抑制率更为明显。吉非替尼的不同剂量对细胞增殖抑制率差异具有统计学意义,F=6.27,P=0.0001,随着剂量的增加,抑制率增加。(2)扶正抗癌方单独使用时对三种细胞的增殖抑制作用。24H扶正抗癌方对不同细胞的影响：经两因素方差分析,扶正抗癌方对不同细胞增殖抑制率差异有统计学意义,F=9.23,P=0.0004,扶正抗癌方对A.549细胞增殖抑制明显。扶正抗癌方的不同剂量对细胞增殖抑制率差异具有统计学意义,P=0.0000,随着剂量的增加,抑制率增加。48H扶正抗癌方对不同细胞的影响：经两因素方差分析,扶正抗癌方对不同细胞的抑制率差异有统计学意义,F=6.54,P=0.0031,扶正抗癌方对AA549及PC9细胞增殖抑制明显。扶正抗癌方的不同剂量对细胞增殖抑制率差异具有统计学意义,P=0.0000,随着剂量的增加,抑制率增加,对于PC9细胞,低剂量促进细胞增殖,高剂量抑制细胞增殖。72H扶正抗癌方对不同细胞的影响：经两因素方差分析,扶正抗癌方对不同细胞的抑制率差异不显著,F=0.44,P=0.6486,扶正抗癌方对AA549及PC9细胞增殖抑制明显。扶正抗癌方的不同剂量对细胞增殖抑制率差异具有显著性,P=0.0000,随着剂量的增加,抑制率增加,对于PC9细胞。3.流式细胞术检测细胞凋亡单用扶正抗癌方或Gifitinib处理三种细胞48h均可促使其凋亡,AA549凋亡率分别为(4.633±0.666)%、(7.8±2.6963)%,H1650凋亡率分别为(5.7667±2.6274)%和(11.5±5.4286)%,PC9凋亡率分别为(13.6667±4.26654)%和(6.6667±2.3180)%,但经联合处理后,A549凋亡率为(12.6333±4.47698)%, H1650凋亡率为(25.4667±20.6011)%PC9凋亡率为(26.8333±10.4357)%,提示扶正抗癌方联合Gifitinib具有协同促进A549、H1650、PC9细胞凋亡的作用。4.扶正抗癌方(fzka)单独干预三种细胞dose-response及time-response实验结果(1)扶正抗癌方对A549进行干预的dose-response实验中,P-EGFR、EZH2均呈剂量依赖的下降趋势,提示,扶正抗癌方对AA549这两种蛋白表达具有正向调节作用,且不同蛋白不同剂量之间,统计分析,p=0.0000,提示具有统计学意义。PPAR-gomma和P53均呈剂量依赖的上升趋势,不同剂量之间统计分析结果p=0.000,具有统计学意义,同样提示扶正抗癌方对A549这两种蛋白表达具有正向调节作用。扶正抗癌方对H1650进行干预的dose-response实验中, EZH2呈剂量依赖的下降趋势,提示扶正抗癌方对H1650这种蛋白表达具有正向调节作用,且不同剂量之间,统计分析,p=0.0077,提示具有统计学意义。对于P-EGFR,没有明显的剂量依赖趋势,但是药物浓度到达一定程度时,P-EGFR表达仍为下降。PPAR-gomma和P53均未呈剂量依赖的上升趋势,不同剂量之间统计分析结果p=0.000,具有统计学意义,提示扶正抗癌方对H1650这两种蛋白表达正向调节作用不明显。扶正抗癌方对PC9进行干预的dose-response实验中,EZH2呈剂量依赖的下降趋势,提示,扶正抗癌方对PC9的EZH2蛋白表达具有正向调节作用,且不同剂量之间,统计分析,p=0.0000,提示具有统计学意义。对于P-EGFR,没有明显的剂量依赖趋势,但是药物浓度到达一定程度时,P-EGFR表达仍为下降。PPAR-gomma和P53均呈剂量依赖的上升趋势,不同剂量之间统计分析结果p=0.000,具有统计学意义,同样提示扶正抗癌方对PC9这两种蛋白表达具有正向调节作用但到达一定浓度后对其变成负向调节。(2)扶正抗癌方对A549细胞time-response干预实验中,P-erk呈现很好的时间相关性,且不同时间点之间统计分析p=0.0036,具有统计学意义。扶正抗癌方对H1650细胞time-response干预实验中,P-AKT、P-erk、P-P38呈现很好的时间相关性,且不同时间点之间统计分析p--0.0000、p=0.0130、p=0.000,具有统计学意义。扶正抗癌方对PC9细胞time-response干预实验中,P-AKT、P-P38呈现很好的时间相关性,且不同时间点之间统计分析p--0.0000、p=0.0046,具有统计学意义。5.扶正抗癌方联合吉非替尼对三种非小细胞肺癌细胞干预目的蛋白和蛋白激酶的变化比较分析结果(1)扶正抗癌方对A549的P-EGFR的单独效应F值为90.31,P值为0.0000,吉非替尼的单独效应F值为70.44,P值为0.0000,两者联合效应的F值为8.32,P值为0.0204,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于P-EGFR蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于P-EGFR蛋白表达的下调影响更加显著,两者交互作用具有统计学意义。EZH2:扶正抗癌方干预后的单独效应F值为49.66,P值为0.0001,吉非替尼的单独效应F值为55.17,P值为0.0001,两者联合效应的F值为1.69,P值为0.2293,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于EZH2蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于EZH2蛋白表达的下调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。ppar-gomma:扶正抗癌方的单独效应F值为2.96,P值为0.1234,吉非替尼的单独效应F值为31.95,P值为0.0005,两者联合效应的F值为2.83,P值为0.1311,说明吉非替尼对于ppar-gomma蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,扶正抗癌方对于蛋白表达影响不显著,不具有统计学意义,二者联合用药对于ppar-gomma蛋白表达的上调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。P53：扶正抗癌方的单独效应F值为80.63,P值为0.0000,吉非替尼的单独效应F值为2.04,P值为0.1913,两者联合效应的F值为26.77,P值为0.0008,说明扶正抗癌方对于P53蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,吉非替尼对于蛋白表达为下调的影响,但不具有统计学意义,二者联合用药对于P53蛋白表达的上调影响更加显著,两者有交互作用具有统计学意义。P-AKT:扶正抗癌方的单独效应F值为8.97,P值为0.0172,吉非替尼的单独效应F值为34.10,P值为0.0004,两者联合效应的F值为8.09,P值为0.0217,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于P-AKT蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于P-AKT蛋白表达的下调影响显著,两者有交互作用具有统计学意义,吉非替尼的下调最为显著。P-erk:扶正抗癌方的单独效应F值为1.43,P值为0.2654,吉非替尼的单独效应F值为22.22,P值为0.0015,两者联合效应的F值为3.72,P值为0.0898,说明吉非替尼对于P-erk蛋白表达具有上调作用,具有统计学意义,扶正抗癌方对于蛋白表达影响不显著,不具有统计学意义,二者联合用药对于P-erk蛋白表达的上调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。P-P38：扶正抗癌方的单独效应F值为8.66,P值为0.0186,吉非替尼的单独效应F值为29.58,P值为0.0006,两者联合效应的F值为0.97,P值为0.3544,说明扶正抗癌方及吉非替尼对于P-P38蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,吉非替尼对于蛋白表达上调较扶正抗癌方更显著,二者联合用药对于p-p38蛋白表达的上调显著,但两者交互作用不具有统计学意义。(2)扶正抗癌方对于H1650的P-EGFR蛋白表达的单独效应F值为3.84,P值为0.0855,吉非替尼的单独效应F值为6.01,P值为0.0399,两者联合效应的F值为3.00,P值为0.1217,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于P-EGFR蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于P-EGFR蛋白表达的下调影响更加显著,两者有交互作用具有统计学意义。EZH2：扶正抗癌方的单独效应F值为89.93,P值为0.0000,吉非替尼的单独效应F值为152.01,P值为0.0000,两者联合效应的F值为22.58,P值为0.0014,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于EZH2蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于EZH2蛋白表达的下调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。ppar-gomma:扶正抗癌方的单独效应F值为8.97,P值为0.0172,吉非替尼的单独效应F值为25.96,P值为0.0009,两者联合效应的F值为2.76,P值为0.1352,说明吉非替尼对于ppar-gomma蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,扶J正抗癌方对于蛋白表达影响不显著,不具有统计学意义,二者联合用药对于ppar-gomma蛋白表达的上调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。P53：扶正抗癌方的单独效应F值为17.71,P值为0.0030,吉非替尼的单独效应F值为25.66,P值为0.0010,两者联合效应的F值为1.65,P值为0.2353,说明扶正抗癌方对于P53蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,吉非替尼对于蛋白表达为下调的影响,但不具有统计学意义,二者联合用药对于p53蛋白表达的上调影响更加显著,两者有交互作用具有统计学意义。P-AKT：扶正抗癌方的单独效应F值为44.61,P值为0.0002,吉非替尼的单独效应F值为2.75,P值为0.1358,两者联合效应的F值为6.90,P值为0.0303,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于P-AKT蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于P-AKT蛋白表达的下调影响显著,两者有交互作用具有统计学意义,吉非替尼的下调最为显著。p-erk:扶正抗癌方的单独效应F值为5.50,P值为0.0471,吉非替尼的单独效应F值为10.08,P值为0.0131,两者联合效应的F值为10.19,P值为0.0128,说明吉非替尼对于P-erk蛋白表达具有上调作用,具有统计学意义,扶正抗癌方对于蛋白表达影响不显著,不具有统计学意义,二者联合用药对于P-erk蛋白表达的上调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。P-P38：扶正抗癌方的单独效应F值为309.69,P值为0.0000,吉非替尼的单独效应F值为118.04,P值为0.0000,两者联合效应的F值为3.92,P值为0.0832,说明扶正抗癌方及吉非替尼对于P-P38蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,吉非替尼对于蛋白表达上调较扶正抗癌方更显著,二者联合用药对于P-P38蛋白表达的上调显著,但两者交互作用不具有统计学意义。(3)扶正抗癌方对PC9细胞P-EGFR蛋白表达的单独效应F值为4.42,P值为0.0686,吉非替尼的单独效应F值为675.00,P值为0.0000,两者联合效应的F值为1.47,P值为0.2598,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于P-EGFR蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于P-EGFR蛋白表达的下调影响更加显著,两者有交互作用具有统计学意义。EZH2：扶正抗癌方的单独效应F值为127.48,P值为0.0000,吉非替尼的单独效应F值为242.55,P值为0.0000,两者联合效应的F值为6.86,P值为0.0307,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于EZH2蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于EZH2蛋白表达的下调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。ppar-gomma:扶正抗癌方的单独效应F值为7.90,P值为0.0228,吉非替尼的单独效应F值为14.59,P值为0.0051,两者联合效应的F值为2.16,P值为0.1800,说明吉非替尼对于ppar-gomma蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,扶正抗癌方对于蛋白表达影响不显著,不具有统计学意义,二者联合用药对于ppar-gomma蛋白表达的上调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。P53：扶正抗癌方的单独效应F值为12.95,P值为0.0070,吉非替尼的单独效应F值为49.45,P值为0.0001,两者联合效应的F值为1.76,P值为0.2208,说明扶正抗癌方对于P53蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,吉非替尼对于蛋白表达为下调的影响,但不具有统计学意义,二者联合用药对于P53蛋白表达的上调影响更加显著,两者有交互作用具有统计学意义。P-AKT:扶正抗癌方的单独效应F值为3.31,P值为0.1066。吉非替尼的单独效应F值为33.39,P值为0.0004,两者联合效应的F值为7.02,P值为0.0293,说明扶正抗癌方和吉非替尼对于P-AKT蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达均下调,二者联合用药对于P-AKT蛋白表达的下调影响显著,两者有交互作用具有统计学意义,吉非替尼的下调最为显著。P-erk:扶正抗癌方的单独效应F值为23.06,P值为0.0014,吉非替尼的单独效应F值为53.75,P值为0.0001,两者联合效应的F值为4.77,P值为0.0605,说明吉非替尼对于P-erk蛋白表达具有上调作用,具有统计学意义,扶正抗癌方对于蛋白表达影响不显著,不具有统计学意义,二者联合用药对于P-erk蛋白表达的上调影响更加显著,但两者交互作用不具有统计学意义。P-P38：扶正抗癌方的单独效应F值为0.04,P值为0.8530,吉非替尼的单独效应F值为17.38,P值为0.0031,两者联合效应的F值为29.24,P值为0.0006,说明扶正抗癌方及吉非替尼对于P-P38蛋白表达具有影响,具有统计学意义,其蛋白表达上调,吉非替尼对于蛋白表达上调较扶正抗癌方更显著,二者联合用药对于P-P38蛋白表达的上调显著,但两者交互作用不具有统计学意义。结论：1.目前相关临床研究结果提示,在吉非替尼治疗基础上,联合中医药较单纯吉非替尼治疗非小细胞肺癌有一定的增效作用,在提高生存质量、减轻毒副作用、增强吉非替尼疗效有一定优势。但仍需多中心大样本随机对照试验提供有高质量的证据支持此结果。2.扶正抗癌方单独对三种细胞进行干预,均能抑制三种细胞(A549、H1650、PC9)增殖。扶正抗癌方冻干粉在同一时间对三种细胞的抑制效果均呈现明显的剂量依赖关系。扶正抗癌方冻干粉对吉非替尼耐药的细胞A549和H1650抑制效果明显强于PC9,对耐药株细胞H1650细胞抑制效最优。扶正抗癌方干预细胞之后细胞之间24h、48h及72h比较分析差异有统计学意义。这也许可以给予我们临床中一点提示,在对Gifitinib不敏感(例如A549)或者耐药(H1650)的患者用药过程中,可以适当加大中药复方汤剂的使用,而对于Gifitinib敏感的患者,我们用药仍然要以Gifitinib为主,如皮疹或者腹泻严重,可适当给予中药复方减轻患者副反应症状,也非常有利于提高恢复患者继续治疗的信心。3.扶正抗癌方联合吉非替尼促凋亡效果优于扶正抗癌方单药或吉非替尼单药,提示扶正抗癌方对吉非替尼治疗非小细胞肺癌有增效增敏作用。流式细胞仪检测凋亡结果提示A549细胞,各组之间差异具有统计学意义,扶正抗癌方及吉非替尼均有促进细胞凋亡的作用,二者联合用药作用下,细胞凋亡更明显,组间差异性具有统计学意义。H1650细胞,各组之间差异具有显著性,扶正抗癌方及吉非替尼均有促进细胞凋亡的作用,二者联合用药作用下,细胞凋亡更明显,但组间差异性不具有统计学意义。PC9细胞,各组之间差异具统计学意义,扶正抗癌方及吉非替尼均有促进细胞凋亡的作用,二者联合用药作用下,细胞凋亡更明显,组间差异性具有统计学意义。扶正抗癌方单独对三种细胞进行干预,均能抑制三种非小细胞肺癌细胞(A549、H1650. PC9)增殖,与吉非替尼联用,对吉非替尼治疗非小细胞肺癌(无突变耐药,继发获得性耐药及敏感细胞)有增敏和增效的作用。4.扶正抗癌方单独使用对A549的P-EGFR、EZH2、PPAR-gomma和P53四种蛋白表达具有正向调节作用。对H1650的EZH2具有正向调节作用,对于P-EGFR,没有明显的剂量依赖趋势,但是药物浓度到达一定程度时,P-EGFR表达仍为下降,而对PPAR-gomma和P53这两种蛋白表达正向调节作用不明显。扶正抗癌方对PC9的EZH2蛋白表达具有正向调节作用.扶正抗癌方对PC9的PPAR-gomma和P53这两种蛋白表达具有正向调节作用但到达一定浓度后对其变成负向调节。另外,扶正抗癌方对A549细胞通过P-erk调节进而影响以上目的蛋白的表达,对H1650细胞通过P-AKT、P-erk、P-p38调节进而影响以上目的蛋白表达,对PC9细胞通过P-AKT、P-p38调节进而影响以上目的蛋白表达。扶正抗癌方联合吉非替尼对A549、H1650、PC9干预后,对比扶正抗癌方、吉非替尼单独干预组,对P-EGFR、EZH2蛋白表达下调,ppar-gomma、P53表达上调,均呈正向调节作用。在A549信号传导通路中,扶正抗癌方与吉非替尼联合使用对P-AKT、 P-erk、P-P38蛋白表达正向调节作用均优于扶正抗癌方、吉非替尼单独使用。在H1650信号传导通路中,扶正抗癌方与吉非替尼联合使用对P-AKT P-P38蛋白表达正向调节作用均优于扶正抗癌方、吉非替尼单独使用。在PC9信号传导通路中,扶正抗癌方与吉非替尼联合使用对P-erk、P-P38蛋白表达正向调节作用均优于扶正抗癌方、吉非替尼单独使用。在吉非替尼治疗基础上,联合中医药较单纯吉非替尼治疗非小细胞肺癌有一定的增效作用。中医药联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌中药复方不单单作用于一条或几条信号通路,亦不像现代提取单体药物作用于一种蛋白或蛋白靶点。肿瘤细胞的增殖、凋亡涉及许多更为复杂的信号通路,我们需要进一步对其进行研究,在已经得到阳性结果的信号传导通路,我们可以通过抑制其表达或者增强其表达,进一步观察下游的目地蛋白是否会有相应的变化,进而验证我们实验所得出的结果。