背景：　　神经母细胞瘤（NB）是婴幼儿最常见的恶性肿瘤之一，早期转移是该肿瘤患儿死亡的主要原因，探明 NB 转移的分子生物学机制始终是此肿瘤研究领域的焦点方向。已有研究表明，NF-κB通路和miRNAs均是NB增殖和转移的重要调控方式，而miRNAs又是众多参与NF-κB通路调节的因子之一。迄今，miRNAs介导NF-κB通路调控NB增殖和转移的研究鲜有报道。我们既往的研究已证实：miR30c在神经母细胞瘤中显著低表达，其预测靶基因IL-1A又正是NF-κB信号转导通路的重要活化因子，所以我们从miR30c着手，以期查明miR30c是否调节IL-1A进而通过NF-κB通路调控NB增殖和转移，并探讨其具体机制，探索NB临床治疗和靶向药物开发的新方向。　　方法：　　①应用实时定量 PCR 技术，检测 16 对神经母细胞瘤原位组织和远处转移组织中miR30c的表达水平；　　②microRNA30c对神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y及GI-Li-N生物学行为研究，分组：miRNA-NC组、miR30c mimics组、ASO-NC组、miR30c ASO组。在神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y和GI-Li-N中瞬时转染miR30c mimics和miR30c ASO，采用平板克隆形成实验、AnnexinV-PI双标流式实验、肿瘤细胞侵袭实验和体外划痕实验检测 miR30c 对细胞生长、侵袭和迁移的影响，利用 Western 蛋白免疫印迹法检测miR30c 对 SHSY5Y 和 GI-Li-N 细胞 IL-1A 蛋白表达水平的影响；　　③EGFP 实验验证microRNA30c直接靶定IL-1A，分组：miR30c mimics+IL-1A 3’UTR组（miR30c mimics与IL-1A野生型序列共转染）、miR30c mimics+IL-1A 3’UTR mut组（miR30c mimics与IL-1A突变型序列共转染）、miR30c mimics NC+IL-1A 3’UTR组（miR30c mimics NC与IL-1A野生型序列共转染）和miR30c mimics NC+IL-1A 3’UTR mut组（miR30c mimics NC与IL-1A突变型序列共转染）。构建IL-1A野生型及突变型3’UTR区并测序，构建含 IL-1A 与 miR30c 结合位点序列（野生型）及其结合位点突变序列（突变型）的EGFP报告载体，检测miR30c mimics与IL-1A野生型序列共转染后，SHSY5Y和GI-Li-N细胞相对EGFP荧光强度的变化；　　④采用siRNA技术敲降IL-1A，分组：siRNA control组和siRNA IL-1A组，采用平板克隆形成实验、AnnexinV-PI双标流式实验、肿瘤细胞侵袭实验和体外划痕实验检测敲降IL-1A对细胞生长、侵袭和迁移的影响，利用Western蛋白免疫印迹法检测敲降IL-1A对SHSY5Y和GI-Li-N细胞IL-1A和AKT蛋白表达水平的影响；　　⑤挽救实验验证miR30c是通过靶定IL-1A发挥细胞生物学功能，在神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y和GI-Li-N中瞬时共转染miR30c mimics和IL-1A/pcDNA3，分组：mimics control组、miR30c mimics组、miR30c mimics+pcDNA3 control组和miR30c mimics+IL-1A/pcDNA3组，荧光定量PCR检测各组miR30c水平、Western蛋白免疫印迹法检测细胞IL-1A、AKT蛋白水平，采用平板克隆形成实验、AnnexinV-PI双标流式实验、肿瘤细胞侵袭实验和体外划痕实验检测共转染miR30c mimics和IL-1A/pcDNA3对细胞生长、侵袭和迁移的影响；　　⑥NF-κB活性检测：在神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y和GI-Li-N中瞬时共转染miR30c mimics和IL-1A/pcDNA3，分组：mimics control组、miR30c mimics组、miR30c mimics+pcDNA3 control组和miR30c mimics+IL-1A/pcDNA3组，凝胶迁移实验检测NF-κB活性，免疫荧光检测细胞核p65从而反映NF-κB活性；　　⑦体内裸鼠实验验证miR30c对体内裸鼠成瘤影响，分组：control空白对照组、mimics NC组和miR30C mimics组，检测瘤块生长情况、免疫组织化学法检测瘤组织IL-1A表达情况、Western蛋白免疫印迹法检测瘤块IL-1A表达情况。　　结果：　　①与NB原位瘤组织相比，miR30c在NB转移瘤组织中表达降低。　　②过表达miR30c后细胞克隆形成能力降低，而封闭 miR30c 的表达后细胞的克隆形成能力较对照组升高，在SHSY5Y细胞中转染miR30c mimics后，克隆形成率降低了46.27±17.91%，而ASO封闭 miR30c后，克隆形成率较对照组上升112.60±7.95%；而在GI-Li-N细胞中转染miR30c mimics后，克隆形成率较对照组降低了66.79±4.62%，ASO封闭miR30c后，克隆形成率上升约 85.06±7.10%；各组细胞之间的凋亡水平无明显差异；过表达miR30c的SHSY5Y细胞的侵袭能力较对照组降低了113.6±3.0（个），而利用ASO封闭miR30c后，SHSY5Y细胞的侵袭能力较对照增加了61.6±7.6（个），过表达miR30c的GI-Li-N细胞的侵袭能力较对照组降低了59.3±2.8（个），而利用ASO封闭miR30c后，GI-Li-N细胞的侵袭能力较对照增加了73.8±4.7（个）；过表达miR30c的SHSY5Y细胞的相对迁移速率较对照组降低了 27.36±3.23%，而利用 ASO 封闭 miR30c 后， SHSY5Y细胞的相对迁移速率较对照组增加了18.22±4.59%，过表达miR30c的GI-Li-N细胞的相对迁移速率较对照组降低了 28.17±2.22%，而利用 ASO 封闭 miR30c 后， GI-Li-N 细胞的相对迁移速率较对照增加了 18.58±3.45%；在 SHSY5Y 细胞中转染miR30c mimics后，细胞中IL-1A蛋白表达水平降低了80.22±2.43%，而ASO封闭miR30c后，细胞中IL-1A蛋白表达水平上升87.50±6.52%，而在GI-Li-N细胞中转染miR30c mimics后，IL-1A蛋白表达水平降低了67.26±1.39%，ASO封闭miR30c后，细胞中IL-1A蛋白表达水平上升约128.10±5.87%。　　③EGFP实验中，在miR30c mimics与IL-1A野生型序列共转染组中，两种细胞相对EGFP荧光强度较对照组均降低，提示miR30c直接靶定调节 IL-1A 的表达，其中，SHSY5Y 细胞相对 EGFP 荧光强度较对照组降低了46.06±4.56%，而GI-Li-N细胞相对EGFP荧光强度较对照组降低了32.22±3.66%。　　④在SHSY5Y细胞中转染SiRNA IL-1A后，AKT的表达水平下降了49.66±1.48%，IL-1A的表达水平下降了57.25±1.65%，而在GI-Li-N细胞中转染SiRNA IL-1A后，AKT的表达水平下降了49.91±1.85%，IL-1A的表达水平下降了62.66±0.82%；在SHSY5Y细胞中转染SiRNA IL-1A后，克隆形成率降低了7.19±0.51%，；而在GI-Li-N细胞中转染SiRNA IL-1A后，克隆形成率降低了7.23±0.56%；转染SiRNA IL-1A后，SHSY5Y细胞凋亡水平增加10.96±1.96，而GI-Li-N细胞凋亡水平增加14.88±2.23%；敲降IL-1A的SHSY5Y细胞的侵袭能力较对照组降低了114.60±6.63（个），敲降IL-1A的GI-Li-N细胞的侵袭能力较对照组降低了 108.10±5.56（个）。　　⑤挽救实验发现，尽管 miR30c mimics+IL-1A/pcDNA3 组有转染 IL-1A/pcDNA3，但 IL-1A 表达并未显著增加，且SHSY5Y 细胞和 GI-Li-N 细胞的侵袭能力较对照组均明显降低；即：虽然转染了IL-1A/pcDNA3，但由于共转染了miR30c mimics，所以miR30c mimics+IL-1A/pcDNA3组并未发挥增强细胞增殖能力的作用。　　⑥神经母细胞瘤转染了 miR30c mimics 之后， NF-κB的表达显著减弱，细胞核p65免疫荧光强度显著降低；与单转染miR30c mimics组及共转染过表达质粒空白对照组相比，miR30c mimics+IL-1A/pcDNA3 组的 NF-κB活性明显增强，细胞核 p65 免疫荧光强度显著增加；　　⑦动物实验：各组裸鼠未见有死亡情况出现，且均成瘤成功；control和mimics NC组裸鼠成瘤生长情况差异不大，而miR30c mimics 组与前两组比较，成瘤体积明显缩小；免疫组化染色显示，miR30c mimics组的裸鼠瘤组织内IL-1A染色强度较对照组明显减弱；蛋白免疫印迹实验显示， miR30c mimics组的裸鼠瘤组织内IL-1A蛋白表达水平较对照组明显减弱。　　结论：　　1. 神经母细胞瘤患者转移肿瘤组织中miR30c的表达明显低于原位瘤组织。　　2. 证实了miR30c对NB细胞生长增殖、侵袭转移的负向调控作用，即：miR30c在NB中发挥着抑制肿瘤演进的作用。　　3. miR30c作为一种抑癌因子，是通过直接靶定IL-1A进而介导NF-κB通路的激活，从而调控神经母细胞瘤细胞的生长、侵袭。　　4. 首次阐明了miR30c→IL-1A→NF-κB这一路径的存在及其在NB演进中发挥的重要调控作用。miR30c和IL-1A作为新的靶点为NB的评估和干预提供了潜在可能，也为NB临床药物研发拓展了新思路。