论文部分内容阅读
胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP），最早发现于培养的小鼠胸腺基质细胞系中，是一种新型的、与白细胞介素-7（IL-7）类似的细胞因子，优先表达于肺、肠、皮肤等上皮细胞，尤其在超敏反应性炎症部位表达极高。功能性TSLP受体复合体是由TSLP受体（TSLPR）和IL-7受体α链（IL-7Rα）组成。体外研究显示，TSLP能够促进树突状细胞（DC）的活化和成熟，活化的DCs能表达聚集辅助T细胞2（Th2）的化学因子胸腺和活化控制趋化因子（TARC）和巨噬细胞源趋化因子（MDC）。另外，被TSLP激活的DCs（TSLP-DCs）还可以启动CD4+T细胞前体向Th2细胞转化，这些Th2细胞能够产生过敏性因子IL-4、IL-5、IL-13和肿瘤坏死因子-α（TNF-α），同时减少IL-10和干扰素-γ（IFN-γ）的生成。这些细胞因子通过促进免疫球蛋白E（IgE）、嗜酸性粒细胞和黏液的产生而启动过敏性炎症。基础和临床研究均证明了TSLP的表达和过敏性皮炎以及哮喘之间有直接的联系，提示TSLP可能在过敏性疾病的发病机制中扮演重要角色。
本研究用OVA诱导小鼠哮喘，根据已知的小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素基因序列设计引物，测得小鼠肺中TSLP mRNA表达量显著升高，并将扩增的该基因与原核表达载体pET28a（+）连接，转化感受态大肠杆菌DH5α，通过酶切鉴定阳性克隆。再将成功构建的重组质粒pET28a（+）-TSLP，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，IPTG诱导表达融合蛋白。SDS-PAGE结果显示在约20 KD附近出现目的蛋白。通过对宿主菌的表达条件如培养基组成，诱导剂浓度，诱导温度等进行了优化筛选，结果表明：在TB+M9（1：1）培养基中，37℃下使用终浓度0.4 mmol／L的IPTG诱导3h，融合蛋白表达量提高到全菌蛋白的18.6％左右，比未优化前增长约15％。本研究为下一步纯化，抗体制备提供了基础，而且有助于认识特应性皮炎、哮喘等炎症的发病机制，也将为治疗此类疾病提供有效的治疗靶位。