论文部分内容阅读
目的观察他克莫司对淋巴细胞增殖、分泌IL-6和sIL-2R及IL-6mRNA, sIL-2RmRNA表达的影响及其通过淋巴细胞对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及VIT-1mRNA表达的影响,探讨其在治疗白癜风中的作用机制。方法本实验选用人Jurkat淋巴瘤细胞株和小鼠B16黑素瘤细胞株为研究对象,采用ELISA法测定他克莫司对淋巴细胞分泌IL-6和sIL-2R的影响,MTT法检测他克莫司对淋巴细胞增殖及淋巴细胞上清液对黑素细胞增殖的影响,NAOH裂解法测定淋巴细胞上清液对黑素细胞黑素合成的影响,多巴氧化法测定淋巴细胞上清液对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响,SYBR GREEN实时荧光定量PCR法分析他克莫司对淋巴细胞IL-6mRNA,sIL-2RmRNA表达的影响及淋巴细胞上清液对黑素细胞VIT-1mRNA表达的影响。结果101～102nmol/L的他克莫司对淋巴细胞增殖无影响,103～104nmol/L的他克莫司对淋巴细胞增殖有抑制作用。ELISA结果显示：102～104nmol/L的他克莫司均可以降低淋巴细胞合成IL-6和sIL-2R(P<0.05),其中103nmol/L和104nmol/L的他克莫司作用显著(与对照组比较,P<0.01)。经他克莫司作用后的淋巴细胞上清液对黑素细胞增殖的影响不明显。经101～104nmol/L的他克莫司作用后的淋巴细胞上清液均可促进黑素细胞黑素合成的增加,其中经高浓度(103nmol/L,104nmol/L)的他克莫司作用后的淋巴细胞上清液对黑素细胞黑素合成的促进作用强于低浓度(101nmol/L,102 nmol/L)。经101～104nmol/L的他克莫司作用后的淋巴细胞上清液均可以提高黑素细胞的酪氨酸酶活性,其中经高浓度(103nmol/L,104nmol/L)的他克莫司作用后的淋巴细胞上清液对黑素细胞酪氨酸酶活性的促进作用强于低浓度(101nmol /L,102nmol/L)。实时荧光定量RT-PCR结果显示：经102nmol/L的他克莫司作用后的淋巴细胞,IL-6 mRNA、sIL-2R mRNA相对表达量均减少,与对照组相比具有统计学意义(P均<0.05),黑素细胞经他克莫司刺激后的淋巴细胞上清液作用后,VIT-1 mRNA相对表达量增加,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论他克莫司对淋巴细胞的直接作用显示：适当浓度的他克莫司对淋巴细胞增殖具有抑制作用,其抑制作用随浓度增加而增强,他克莫司可降低淋巴细胞合成IL-6、sIL-2R及IL-6 mRNA、sIL-2R mRNA的表达。经他克莫司作用后的淋巴细胞上清液对黑素细胞的间接作用显示：经他克莫司作用后的淋巴细胞上清液虽对黑素细胞增殖无影响,但可促进黑素细胞黑素合成的增加、提高黑素细胞的酪氨酸酶活性及显著增强黑素细胞VIT-1mRNA的表达,这可能是他克莫司治疗白癜风的机制之一。