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一、目的与意义近年来随着我国经济的不断发展,人们对石油、天然气等自然资源的需求日益增长,未来对海洋资源的开发将会越来越多；加之近年来我们与周边国家关于领海及海上岛屿的纷争日益激烈,未来发生海上战争以及生产事故造成烧伤的几率增高,伤员受伤创面极有可能遭受海水污染,面临海水浸泡的二次打击。海水具有高渗、碱性、低温、有菌等特殊理化性质,有研究显示烧伤合并海水浸泡会造成机体的电解质紊乱、酸碱失衡、高渗性脱水、血流动力学紊乱以及严重感染,容易造成创面延迟愈合乃至多脏器功能衰竭；严重烧伤后人体将发生不同程度的低血容量休克,肠道是烧伤后最先出现缺血、缺氧损害的器官,而最后恢复供血的内脏器官,烧伤后肠道的损伤容易导致全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合征(MODS)的发生。目前对单纯烧伤导致肠道功能损伤的研究较为深入,而有关烧伤后遭受海水浸泡对肠道的损伤的影响以及由此带来的机体反应的影响研究较少。本研究以20%TBSA深二度兔烫伤合并海水浸泡为研究对象,设单纯烫伤组和烫伤后淡水浸泡组作为对照,通过检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)活力、脂质过氧化物(LPO)水平和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量白细胞介素6(IL-6)含量,肠道组织中PGs含量,光镜、电镜观察小肠的炎症反应情况及结构损伤状况,和小肠粘膜细胞中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达情况观察小肠粘膜上皮细胞的凋亡情况,来探讨海水浸泡对烧伤后肠道损害的影响,为研究烧伤合并海水浸泡的救治提供基础的理论依据。二、材料和方法1、实验动物与分组：成年健康新西兰兔63只,体重为2.0-2.5Kg,雌雄不限,按体重配伍随机分为单纯烫伤对照组(A组)、烫伤后淡水浸泡组(B组)、烫伤后海水浸泡组(C组)三大组,每大组实验动物各21只。2、致伤方法：实验动物经3%的硫喷妥钠按20mg/kg剂量腹腔注射麻醉后,用4%的硫化钠行背部脱毛,并用清水将脱毛区域清洗,自然晾干。将各组动物四肢固定,将背部实验区域置于95℃恒水浴中12S,造成背部区域20%TBSA的深二度(病理切片已证实)烫伤创面。致伤后将C组动物颈部以下(模拟伤员落水后情况)浸泡于海水中,B组动物颈部以下浸泡于淡水中,使创面浸泡于水面下,A组动物不做浸泡处理,实验动物致伤后禁食、禁水,各组分别在浸泡2h、4h、8h三个时间点处死7只,同时从心脏采血和取小肠组织标本。3、检测指标及方法：动物处死后从心脏采集4m1静脉血,用EDTA管收集后,用离心机离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,在-20℃冰箱保存；称取重量,加入一定量的PBS液(PH7.4),用匀浆器将标本匀浆充分,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,分装后一份待检测,其余分装后放入-20℃冰箱冷冻备用；再取小肠用PBS液清洗干净,放入8%的甲醛溶液固定备用。用ELISA法检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物(LPO)水平和肠道组织中PGs含量；用ELISA法检测血浆中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量；光镜、电镜观察小肠的炎症反应情况及结构损伤状况；采用SP法检测小肠粘膜细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况。4、数据处理：采用SPSS13.0统计软件包进行统分析,所有实验数据应用x±s表示,对血浆中SOD活力和LPO水平、IL-6和TNF-a含量、肠道组织中PGs含量、小肠粘膜细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况进行析因方差分析、单因素方差分析,组内多重比较采用SNK方法,P<0.05为差异有统计学意义。三、结果1、兔血浆中氧自由基超氧化物歧化酶(SOD)活力和脂质过氧化物(LPO)含量变化：各组兔血清中SOD活力随着浸泡(或致伤)时间的延长,其含量明显减少,在浸泡8h时含量最低；海水浸泡组中SOD活力在各个时间点明显低于淡水浸泡组和单纯对照组,SOD活力随浸泡(或致伤)时间的延长降低更明显。各组兔血浆中LPO含量随着浸泡(或致伤)时间延长,含量明显增高,在伤后8h时含量最高,各组间差异有统计学意义(P<0.01)；海水浸泡组中(LPO)含量在各个时间点明显高于淡水浸泡组和单纯对照组,在海水浸泡组中(LPO)含量增加更明显。2、小肠组织中前列腺素(PGs)含量变化：各组兔小肠组织中PGs含量随着浸泡(或致伤)时间延长,其含量明显减少,在伤后8h时含量最低；在海水浸泡组中肠组织中PGs含量在各个时间点明显低于淡水浸泡组和单纯对照组,海水组肠组织中PGs含量降低更明显。淡水浸泡组与单纯烫伤组比较,PGs含量在伤后2h已出现明显差异,并且随着致伤时间的延长淡水组血浆PGs含量下降明显,在伤后8小时差异最大。各组间及时相点含量有显著差异(P<0.01)。3、各组兔血浆中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量变化：各组兔血浆中IL-6含量组间差异有显著性(P<0.01),以单纯烫伤组组最低,海水组最高,不同时相点间差异有显著性(P<0.01),随致伤时间延长逐渐增高,8小时最高。各组兔血浆中TNF-α含量组间差异有显著性(P<0.01),以单纯烫伤组最低,海水组最高,我们可以看出在2h时单纯烫伤组、淡水组、海水组组间差异不显著(P=0.532),在4h、8h时间点各组组间差异显著,(P<0.01),不同时相点间差异有显著性(P<0.01),随致伤时间延长逐渐增高,8小时最高。4、小肠组织粘膜上皮细胞形态学变化：单纯烫伤组中绒毛结构轻度水肿,粘膜上皮细胞排列规则,有少量的淋巴细胞、中性粒细胞浸润,有少许毛细血管扩张充血,随着时间的延长,炎症细胞少量增多。淡水浸泡组中绒毛结构水肿程度较单纯烫伤组有所加重,粘膜上皮细胞形态结构无异形,但有少许脱落,固有层及粘膜下层疏松水肿,血管扩张充血,可见较多的淋巴细胞、中性粒细胞浸润；在淡水浸泡组内,随着时间的延长,炎症细胞逐渐增多、组织水肿逐渐加重、血管扩张逐渐加重。海水浸泡组中绒毛结构中度水肿,固有层及粘膜下层内疏松水肿,血管扩张充血加重,随着时间的延长,粘膜上皮脱落逐渐增多,淋巴细胞、中性粒细胞浸润逐渐增多。总体而言,海水浸泡组的炎症延长程度较淡水浸泡组重,淡水浸泡组的重于单纯烫伤组,在各组内随着时间的延长,炎症亦逐渐加重。5、小肠粘膜中Bcl-2和Bax凋亡蛋白的表达情况：Bax及Bcl-2阳性染色为棕黄色颗粒,定位于细胞质,有时可见胞膜和(或)核膜着棕黄色,以细胞呈清晰棕色或棕褐色为阳性,以细胞无棕褐色或与背景一致极淡的棕色为阴性。单纯烫伤组、淡水浸泡组、海水浸泡组中小肠粘膜组织中凋亡蛋白Bax和Bcl-2致伤后随着时间推移,表达逐渐增强。在海水浸泡组中小肠组织中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达在浸泡4h、8h的明显强于淡水浸泡组和单纯对照组,在浸泡2h时与淡水浸泡组和单纯对照组相比差异不明显(P>0.01)。各组间Bcl-2和Bax凋亡蛋白的表达有显著差异(P<0.01)。四、结论1、烫伤合并海水浸泡会加重肠道组织的缺血、缺氧损伤。海水浸泡使血浆中氧自由基明显增加,肠粘膜组织中前列腺素含量明显减少,氧自由基的增多及前列腺含量的减少表明海水浸泡加重了烧伤后小肠别的缺血、缺氧损伤。2、烫伤合并海水浸泡会加重烧伤后肠道的炎症反应,破坏了肠道的屏障功能。海水浸泡使机体产生大量的炎症因子,促进了肠粘膜上皮细胞的凋亡,破坏了肠道的屏障功能。3、兔烫伤合并海水浸泡后的肠道损伤情况与海水浸泡的时间有明显关联,随着海水浸泡时间延长,其肠道损伤越明显。