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目的：通过基因工程技术，表达梅毒螺旋体（Treponema pallidum, Tp）重组蛋白Tp0463，探讨其在梅毒临床血清学诊断中的价值，为发现Tp新的候选诊断抗原提供实验依据。方法：从Genbank获取Tp0463蛋白的基因序列，以Tp Nichols标准株的全基因组DNA为模板，PCR扩增该基因编码第8-110号氨基酸的基因片段；将目的基因克隆入T-A克隆载体pMD18-T中，再亚克隆入原核表达载体pET28a(+)中，构建重组质粒pET28a(+)/Tp0463，经PCR、双酶切与测序鉴定后转化至表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中，IPTG诱导表达蛋白，SDS-PAGE分析目的产物的表达形式，用Ni-NTA亲和层析法纯化目的重组蛋白，SDS-PAGE分析纯化蛋白的纯度，BCA法测定纯化蛋白浓度；Western blot鉴定表达产物的免疫反应性（抗原性）和特异性。以纯化重组蛋白TP0463包被微孔板，建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，检测标准梅毒阳性血清、阴性血清共40份，优化ELISA反应条件；以优化的ELISA检测体系随机检测临床诊断明确的梅毒患者血清150份、健康人血清份150份、易发生交叉反应的人群（类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、结核病患者及孕妇）血清40份，与金标准梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）进行平行比较，初步评价重组抗原Tp0463在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果： PCR扩增出一大小约330bp的目的片段（含引物），重组质粒经PCR、双酶切和测序（测序结果与GenBank登录序列完全一致）鉴定证实插入片段为目的基因Tp0463；SDS-PAGE分析显示，构建的pET28a(+)/Tp0463原核重组表达菌在IPTG诱导下表达了一相对分子量约为16kDa的重组蛋白，在宿主菌体细胞内主要以可溶性方式存在，经Ni-NTA亲和纯化后，纯度在95%以上；Western-blot结果显示目的蛋白仅能与标准梅毒阳性混合血清发生特异性反应，而不与非梅毒混合血清反应。以重组蛋白为已知抗原建立间接ELISA法，检测标准梅毒阳性和阴性血清，其阳、阴性符合率分别为95.45%和100%，总符合率为97.5%；对340份临床标本随机进行检测，与金标准TPPA法比较，建立的ELISA法的总灵敏度为88.7%，低于TPPA法(P＜0.05)，特异度为100%，两种方法的总符合率为95.0%。结论：1.成功构建Tp0463原核表达重组质粒，在宿主菌内诱导高效表达重组目的蛋白，该蛋白有良好的免疫反应性。2.与金标准TPPA方法相比，基于重组Tp0463抗原的ELISA方法具有较好的敏感性和高度特异性，显示出重组Tp0463蛋白潜在的临床诊断价值，但其临床应用有待进一步评价。