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目的:探讨肿瘤抑制基因XAF1对放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R的生长、增殖、凋亡情况及对其放射敏感性的影响,为治疗鼻咽癌提供新的思路。 方法:本研究利用慢病毒转染CNE-2R细胞,继而运用qRT-PCR实验和Western Blot实验,检测XAF1转染前后在CNE-2R细胞的mRNA和蛋白的表达,判定转染是否成功。并分别运用CCK-8实验、流式细胞术(FCM)检测XAF1转染前后细胞的增殖、凋亡及周期变化。另外,本研究还将对转染前后的细胞进行X线照射处理,运用克隆形成实验观察过表达XAF1后,CNE-2R细胞放射敏感性的变化。 结果:(1)用慢病毒转染CNE-2R细胞,成功构建了表达XAF1的XAF1-CNE-2R细胞株。本实验以XAF1-CNE-2R组作为实验组,以NC-CNE-2R组作为阴性对照组,以CNE-2R组为空白对照组。(2)实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法分别发现XAF1mRNA和蛋白在实验组细胞处于高水平表达。而在阴性对照组和空白对照组中,XAF1则处以较低的表达水平。(3)三组细胞分别接受不同剂量射线照射后,通过CCK-8试验,XAF1-CNE-2R实验组细胞增殖活性与NC-CNE-2R阴性对照组及CNE-2R空白对照组细胞相比降低,而两对照组间无明显差异。(4)通过克隆形成试验,实验组细胞的放射敏感性较阴性及空白对照组高,而两对照组间未见明显差异。(5)通过流式细胞术检测细胞周期,发现XAF1过表达后,CNE-2R细胞G2/M期所占比例增加。与两对照组相比,差异有统计学意义。(6)运用流式细胞术对细胞的凋亡进行检测发现,XAF1过表达后,无论照射前后,实验组细胞凋亡率均较对照组偏高;且照射后凋亡率大于照射前,差异有统计学意义。 结论:(1)慢病毒可以稳定地转染人鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R;用慢病毒载体构建的转染细胞株稳定的过表达XAF1。(2)XAF1在人鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R高水平表达后,增强了CNE-2R细胞的放射敏感性;XAF1有可能是鼻咽癌治疗潜在的放疗增敏剂。