【摘 要】
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LRP1B基因做为一个新的候选肿瘤抑制基因,在多种肿瘤中发挥重要作用.但就其在肿瘤发生发展中的变异机制及进一步的功能研究没有深入的报道,该文就LRP1B基因在非小细胞肺癌肿
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LRP1B基因做为一个新的候选肿瘤抑制基因,在多种肿瘤中发挥重要作用.但就其在肿瘤发生发展中的变异机制及进一步的功能研究没有深入的报道,该文就LRP1B基因在非小细胞肺癌肿瘤发生与演进中的表达缺失机制及其抵抗细胞浸润和转移功能进行了初步的探讨.该研究应用RT-PCR、Southern杂交及内含子剪接位点特异性PCR等方法对17个不同的NSCLC细胞系cDNA序列的外显子1至外显子16区域进行初步筛查,对表达异常片段测序后确定LRP1B cDNA异常表达部位及形式.结果发现17个不同的NSCLC细胞系中有9个细胞系存在E7缺失、E7重复、E4-E7和E4-E8缺失等4种不同的异常形式,造成编码氨基酸截短.其中主要变化发生在外显子7.发生机制存在LRP1B DNA的缺失,但未发现剪切位点的突变.鉴于肿瘤细胞染色体存在广泛的数目异常与结构畸变,应用G显带技术对LRP1B基因表达异常的部分细胞系的染色体进行细胞遗传学分析.结果LRP1B基因所在位置2q在各肿瘤细胞系中变化十分复杂.选取LRP1B特异性E68和E90序列,构建RNAi重组体,转染鼠成纤维细胞NIH3T3、低浸润SPC-1-A细胞系及低分化GLC-82细胞系,通过人工基底膜实验、流式细胞技术、软琼脂及RT-PCR等技术研究细胞系转染前后侵袭及转移能力、细胞周期及基因表达情况.结果显示该基因的表达被阻断后,可使肿瘤细胞的转移能力及细胞增殖能力发生显著的改变.
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