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目的:调查青岛地区医院内感染铜绿假单胞菌的耐药现状,并确定多重耐药菌株产β-内酰胺酶基因种类,及酶活性与耐药的关系。
方法:采集临床标本,常规分离培养,采用MicroScan autoSCAN-4系统进行菌种鉴定,仪器自动分析15种抗生素最低抑菌浓度(MIC)浓度,药敏结果判定符合临床和实验室标准协会(CLSI)标准,以敏感(S)、中介(I)、耐药(R)报告结果。对疑似产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌分离株,采用纸片法进行检测。初步确证铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶者,提取细菌基因组DNA,利用PCR技术检测耐药基因种类。采用反复冻融法提取β-内酰胺酶,用头孢噻吩法测定其活性,并分析酶活性与耐药的关系。
结果:收集临床标本分离到110株铜绿假单胞菌,并做临床常用抗生素药敏试验结果显示对青霉素类、头孢菌素类抗生素、头霉素类抗生素头孢西丁的耐药率均较高;对碳青酶烯类抗生素亚胺培南耐药率较低为21.82%,对氨基糖苷类抗生素阿米卡星及氨曲南的敏感率分别为67.27%和43.64%。PCR试验检测β-内酰胺酶基因型,本研究中110株铜绿假单胞菌中,有68株扩增出了TEM基因,24株扩增出了SHV基因,4株扩增出了GES基因,2株扩增出了VIM基因,22株扩增出了DHA基因,未扩增出CTX-M-1和OXA基因,有74株缺失OprD-2基因。所有的铜绿假单胞菌均产生β-内酰胺酶,但不同菌株的酶活性不同,分析酶活性和实验菌株对抗生素的最低抑菌浓度(MIC)发现,大多数酶活性高的菌株耐药程度比较重,但耐药程度重的菌酶活性不一定高,说明本地区铜绿假单胞菌的耐药性的产生主要依靠其产生超广谱β-内酰胺酶。
结论:青岛地区医院内感染铜绿假单胞菌对临床常用抗生素耐药性和全国其他地区有差别;本地区铜绿假单胞菌产生多重耐药的主要原因为产超广谱β-内酰胺酶,依次为TEM型(61.82%)、SHV型(21.82%);而OprD-2基因的缺失率较高(67.27%),但不是造成多重耐药的主要原因。