鸡痘病毒（Fowlpox virus，FPV）是重要的动物病毒表达载体，在疾病的控制中起到了重要的作用，以鸡痘病毒为载体已经研制出许多种重组病毒疫苗，其中有的已经商业化。构建表达多个病原体基因的重组鸡痘载体疫苗对于面临多种疾病威胁的养禽业来说尤其具有重要的意义。禽流感(Avian influenza，AI)、传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis，ILT）和鸡痘（Fowlpox）是均能引起感染禽呼吸道疾病，给养禽业造成了严重的经济损失。目前传统方法制备的疫苗对防制这些疾病起到了有效的作用。但常规疫苗的使用存在一些难以克服的缺陷，如影响疫情监测、生产成本高等，需要能够区分野毒感染的、生产成本高的新型疫苗来替代常规疫苗。本试验分别将H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）的HA和NA基因、传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）的gB基因插入到鸡痘病毒转移载体早晚期启动子LP2EP2之下，构建同时含有HA、NA和gB基因以及报告基因LacZ（晚期启动子P11控制之下）鸡痘病毒转移载体。利用脂质体转染技术将转移载体导入到事先感染鸡痘病毒的鸡胚成纤维细胞中，经过6轮蓝斑纯化获得了包含了AIV的HA和NA基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ的重组鸡痘病毒，称为rFPV-HA/NA/gB。PCR检测证明，rFPV-HA/NA/gB基因组中含有完整的AIV的HA、NA基因和ILTV的gB基因；间接免疫荧光试验和Western-blot试验证明，AIV的HA、NA蛋白和ILTV的gB蛋白在rFPV-HA/NA/gB感染的CEF细胞中均能获得表达。