论文部分内容阅读
研究目的1、观察载脂蛋白E(ApoE)模拟肽ApoE23对脓毒血症小鼠血浆LPS浓度变化的影响。2、研究ApoE23对脓毒血症小鼠肝脏LPS代谢相关受体表达的调节作用。研究方法1、ApoE23合成采用固相合成法,高效液相色谱(HPLC)技术进行纯化；采用B组鼠伤寒沙门菌诱导脓毒血症C57BL小鼠模型；实验小鼠分三组：(1)感染对照组；(2)脓毒血症组；(3) ApoE23治疗组。2、不同组小鼠血浆LPS(磷酸脂多糖)浓度测定采用连续透射免疫比浊法。3、采用定量RT-PCR技术及Western-Blot技术检测不同组别小鼠肝脏中低密度脂蛋白受体(LDLR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)、多配体蛋白聚糖-1(SDC1)、清道夫受体B1(SRB1)及ApoEmRNA及蛋白质表达水平的变化。研究结果1、脓毒血症组小鼠腹腔注射B组鼠伤寒沙门菌后1h血液细菌培养即分离到B组鼠伤寒沙门氏菌,小鼠肝脏病理切片表现为不同程度的炎性细胞浸润。血浆LPS浓度测定发现,细菌腹腔注射后1h,小鼠血浆中LPS浓度已开始升高,3h、24h维持在较高水平。ApoE23治疗后小鼠肝脏炎症病变明显减轻,血浆LPS浓度也明显低于脓毒血症组。2、与感染对照组相比,脓毒血症组小鼠肝脏LDLR、LRP、SDC1在mRNA和蛋白质表达水平均有不同程度的降低,而SRB1变现为不同程度的升高；与脓毒血症组相比,ApoE23治疗后,肝脏LDLR在1、3、24h的mRNA和蛋白质表达水平均升高；LRP在mRNA表达水平没有改变,1h和3h蛋白质表达水平升高；SDC1与SRB1在1h的mRNA表达水平表现为一过性变化。3、与感染对照组相比,脓毒血症组小鼠肝脏ApoE在1h、3h的mRNA和蛋白质水平表达下降；ApoE23治疗后,与脓毒血症组相比,ApoE在mRNA和蛋白质表达水平均没有明显改变。结论1、ApoE23能够明显改善脓毒血症小鼠肝脏组织炎症侵润,并明显降低脓毒血症小鼠血浆中LPS浓度,发挥抗脓毒血症效应。2、脓毒血症时肝脏LPS代谢相关受体表达下降,导致LPS在肝脏中代谢障碍,上述病理生理变化加重血浆LPS浓度的升高。ApoE23治疗促进肝脏LDLR, LRP表达水平回升,加速LPS在肝脏中的代谢,发挥抗脓毒血症效应。3、ApoE对脓毒血症的治疗作用目前仍存在争议,ApoE缺陷或是浓度过高均有可能诱发脓毒血症,所以脓毒血症时保持稳定的血浆ApoE水平将有利于脓毒血症的转归。由于ApoE主要在肝脏合成及代谢,药物ApoE23治疗之后我们发现肝脏ApoE的表达没有发生改变,外源性ApoE23不会对肝脏本身ApoE的合成代谢产生影响。