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覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的果实,其近成熟干燥果实为常用中药,具有补肾固精、缩尿、美白等功效。覆盆子在食品和药品行业中应用广泛,但目前对其质量控制方法、有效成分及其美白作用机制的研究较少。为此,本文采用HPLC指纹图谱结合主要成分定量分析对覆盆子质量控制方法进行了研究;并对其美白功效的物质基础、作用机制进行了初步探讨,以期为覆盆子的进一步开发利用提供科学依据。
首先,采取溶剂萃取法和现代色谱分离技术对覆盆子活性成分进行研究,从中分离得到了两个主要黄酮类化合物,HPLC检测纯度达到98.0%,利用现代光谱(NMR,MS,IR,UV)技术鉴定分别为金丝桃苷(hyperoside)和椴树苷(tiliroside)。
然后,建立HPLC方法,以60%乙醇为提取溶剂,ZORBAX Eclipse SB—C18为分析柱(5μm,4.6×250 mm),流动相为乙腈—0.5%冰醋酸,梯度洗脱,流速1 ml/min,检测波长340 nm,柱温30℃,进样量为10 μl,对14批不同产地覆盆子样品进行了分析,结果获得了理想的指纹图谱,确定了9个共有峰,并计算了14个样品的相似度。同时,对不同产地覆盆子药材中金丝桃苷和椴树苷进行了定量分析。研究结果表明,结合指纹图谱和定量分析,可以更有效地控制覆盆子药材的质量。建议未知药材的HPLC指纹图谱与本文得出的对照HPLC指纹图谱比对,要求其相似度>0.9,且金丝桃苷含量不低于0.431 mg/g,椴树苷的含量不低于0.227 mg/g,为优质覆盆子药材。
本文还对覆盆子美白的物质基础及作用机制进行了初步探讨,结果显示覆盆子中椴树苷具有较好的美白功效。采用酪氨酸酶氧化模型,首次报道了椴树苷对单酚酶和二酚酶的抑制类型,均为竞争性抑制;并选用B16小鼠黑色素瘤细胞模型,检测了椴树苷在B16黑色素瘤细胞内的抑制酪氨酸酶和黑色素生成的活性。研究结果皆显示椴树苷抑制效果优于阳性对照熊果苷。
最后,为了以后更好地开发利用覆盆子黄酮化合物,本实验优化了覆盆子总黄酮制备工艺。产品得率为1.7%,紫外分光光度法测得其总黄酮含量为73.4%,通过HPLC法测定总黄酮中金丝桃苷和椴树苷含量分别为14.02%和6.79%。