论文部分内容阅读
目的： 观察一贯煎对CCl4/2-AAF诱导大鼠肝纤维化模型的干预作用及其对胎肝干细胞的分化的影响。 方法： 采用Wistar雄性大鼠，30％ CCl4-橄榄油溶液2ml/kg皮下注射，2次/w，共9w，并联合2-AAF10mg/Kg于造模第7w起灌胃，1次/d，基7d，制备大鼠CCl4/2-AAF肝纤维化模型。实验一:造模第7w开始，模型大鼠随机分为单纯CCl4组(CCl4)、CCl4/2-AAF组(CCl4/2-AAF)、一贯煎组(YGJ)和索拉菲尼组(SOPA)，干预组于持续造模的同时分别以一贯煎、索拉菲尼灌胃治疗至9w末;正常组、模型组大鼠予等体积的蒸馏水灌胃。实验二:造模第7w开始，模型大鼠随机分为单纯CCl4组(CCl4)，CCl4/2-AAF组(CCl4/2-AAF)，Dlk-1+胎肝干细胞组(FLSPC)，FLSPC+一贯煎组(FLSPC+YGJ)和FLSPC+索拉菲尼组(FLSPC+SORA)，继续造模的同时予以细胞及药物干预，各干预组均脾脏内植入Dlk-1+FLSPC，并分别以等体积蒸馏水、一贯煎和索拉菲尼灌胃治疗至9w末。检测指标:①观测大鼠一般情况，肝脾质量等;②检测血清肝功能;③H&E和天狼猩红染色观察肝脏组织病理组织学变化;④RT-PCR、Western blot及免疫组织化学等方法检测肝组织α-SMA、collagenⅠ(ColⅠ)、CK7、CK19、HEP、OV6等含量的表达;⑤α-SMA、CK19、OV6、HEP、HNF4α与Dio免疫荧光共染观察胎肝干细胞的分化特征。 结果： 实验一:①与正常组比较，CCl4组大鼠正常肝小叶结构消失，肝细胞广泛气球样变及脂肪变性，汇管区及纤维间隔可见大量炎性细胞浸润，天狼猩红染色胶原面积较正常组显著升高(p＜0.01);血清ALT、AST活性及TBIL含量显著升高（p＜0.01或p＜0.05），ALB含量显著降低(p＜0.05)。②与正常组比较，CCl4/2-AAF组肝细胞坏死明显，广泛窦周纤维化伴大量炎性细胞浸润，胶原面积较正常组显著升高(p＜0.01);ALT、AST、TBIL显著升高(p＜0.01)，ALB含量显著降低(p＜0.05)。与CCl4/2-AAF组比较，一贯煎组肝细胞坏死明显减轻，有少量炎性细胞浸润，天狼猩红胶原染色阳性面积显著减少(p＜0.01);ALT、AST显著降低（p＜0.01），ALB显著升高(p＜0.05);索拉菲尼可显著减少天狼猩红胶原染色阳性面积(p＜0.01)，但对肝功能改善不显著。③与正常组相比较，CCl4/2-AAF组肝组织α-SMA、ColⅠ、OV6、Sox9、EpCAM、CK7、CK19等表达显著增加(p＜0.01)，HEP表达显著降低(p＜0.01);与CCl4/2-AAF组相比，一贯煎组α-SMA、ColⅠ、OV6、Sox9、EpCAM、CK19等表达显著减少（p＜0.01或p＜0.05），索拉菲尼组SOX9、CK19表达显著减少(p＜0.01或p＜0.05)。 实验二:①组织病理染色显示CCl4/2-AAF组肝细胞广泛脂肪变性伴炎性坏死，广泛窦周纤维化并伴有大量炎性细胞浸润，天狼猩红胶原面染色阳性积较显著升高(p＜0.01);与CCl4/2-AAF组比较，各干预组肝细胞脂肪变明显减轻，FLSPC组可见大量新生胆管;FLSPC+YGJ及FLSPC+SORA组少见胆管增生，天狼猩红胶原染色阳性面积亦显著减少(p＜0.01)。②与正常组比较，CCl4/2-AAF组ALT、AST及TBIL显著升高(p＜0.01)，ALB显著降低（p＜0.05）;与CCl4/2-AAF组比较，FLSPC组、FLSPC+YGJ组和FLSPC+SORA组的ALT、AST及TBIL均显著降低（p＜0.01或p＜0.05）。③与正常组相比较，CCl4/2-AAF组α-SMA、ColⅠ、OV6、CK7、CK19表达显著升高(p＜0.01)，HEP表达显著降低(p＜0.01);与CCl4/2-AAF组比较，FLSPC+YGJ及FLSPC+SORA组α-SMA、ColⅠ、CK7、CK19的表达显著减少(p＜0.01或p＜0.05)，HEP表达升高(p＜0.01);且与FLSPC组比较，FLSPC+YGJ及FLSPC+SORA组α-SMA、ColⅠ的mRNA表达显著降低(p＜0.01)，HEP mRNA表达显著升高（p＜0.01或p＜0.05），FLSPC+YGJ组CK7蛋白含量显著降低(p＜0.05)。④α-SMA、CK19、OV6、HEP、HNF-4α与Dio免疫荧光共染结果显示，FLSPC组α-SMA、CK19与Dio共染表达较多，HEP、HNF4α与Dio共染较少;与FLSPC组比较，FLSPC+YGJ及FLSPC+SORA组α-SMA、CK19与Dio的共染表达较少;HEP、HNF-4α与Dio共染表达较胎肝干细胞组增加。 结论： (1)大鼠在CCl4造模的基础上给予2-AAF抑制肝细胞再生，肝脏增生的卵圆细胞主要向肌成纤维细胞分化，促进肝纤维化的进展; (2)一贯煎可显著抑制CCl4/2-AAF模型大鼠肝纤维化的进展，其主要效应机制与该方抑制肝干细胞向肌成纤维细胞分化有关; (3)胎肝干细胞移植能够显著改善CCl4/2-AAF模型大鼠的肝功能; (4)一贯煎可抑制移植后入肝的胎肝干细胞向肌成纤维细胞分化，促进其向肝细胞分化，从而改善肝纤维化。