禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类传染综合征,人类亦能被感染,且死亡率较高。近年来禽类H5N1亚型流感在全球范围内的不断爆发引起了世界的高度关注,所以建立特异、准确、敏感检测禽流感的方法,成为迫在眉睫的问题,也成为目前研究的热点。本研究利用单克隆抗体技术制备禽流感病毒（AIV）血凝素蛋白单克隆抗体,纯化后用异硫氰酸根荧光素（FITC）进行标记,制备荧光抗体,结合直接免疫荧光实验（dFAT）建立检测H5N1亚型AIV的检测方法,并将其与其他AIV毒力检测方法进行比较,同时通过免疫组化的方法运用荧光抗体检测了AIV在感染动物体内的分布情况。将禽流感病毒HAB/01株纯化后免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用间接ELISA筛选阳性细胞孔,再经有限稀释法克隆培养,筛选稳定分泌单抗的细胞株。本研究共获得3株稳定分泌抗禽流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B6、2A3和3A5。其中1B6为IgM,2A3和3A5为IgG₁类型;经过鉴定:其腹水HI效价分别为1:2⁶、1:2⁶、1:2⁸;且与新城疫病毒及其他亚型的禽流感病毒不发生交叉反应;Western-blot分析表明,3A5株单抗为抗禽流感病毒血凝素蛋白单抗。采用G蛋白亲和柱层析对腹水进行纯化,将纯化的禽流感病毒血凝素蛋白单抗用FITC标记制备荧光抗体,并对该荧光抗体进行质量鉴定,试验结果表明,所制备的荧光抗体具有特异性和较强的敏感性,可初步应用于AIV的实验室检测。