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目的肾透明细胞癌(cc RCC)在代谢上的改变包括有氧糖酵解,提高的戊糖磷酸途径活性和降低的氧化磷酸化等。磷酸果糖激酶(PFK),糖酵解途径的关键酶,具有L、M和P亚型并在不同的组织分布。到目前为止仍然不清楚哪种亚型PFK大量表达在cc RCC中,是否在促进有氧糖酵解和大分子的生物合成,以及有支持细胞增殖的重要作用。研究方法1.q PCR、Western blot检测肾透明细胞癌组织中PFKP、PFKM和PFKL的表达。免疫组化检测肾透明细胞癌组织中PFKP的蛋白水平。2.q PCR、Western blot检测正常肾小管上皮细胞HK-2、肾透明细胞癌细胞系Caki-1、769-p和786-O细胞的PFKP表达。3.si RNA干扰Caki-1、769-p和786-O细胞PFKP的表达,检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。4.si RNA干扰Caki-1、769-p和786-O细胞PFKP的表达,检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成、氧气消耗和PFK1酶活性。5.建立稳转sh PFKP的Caki-1细胞,使用LCMS检测代谢组的变化。6.建立稳转shp53的Caki-1细胞,探索p53在抑制PFKP诱导的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及葡萄糖摄取、乳酸生成和氧气消耗的改变中的作用。7.使用稳转sh PFKP的Caki-1细胞进行裸鼠成瘤实验。研究结果1.磷酸果糖激酶的血小板亚型(PFKP)为人类肾脏透明细胞癌主要的PFK亚型并且在肿瘤中显著上调。2.抑制PFKP不仅可以通过诱导细胞周期阻滞和凋亡降低肾脏透明细胞癌细胞增殖,抑制PFKP还可以导致糖酵解、戊糖磷酸途径和核苷酸合成下降,并伴有三羧酸循环激活。3.p53基因的激活是敲低PFKP后肾脏透明细胞癌细胞增殖减慢及代谢异常的机制之一。4.在体内实验中抑制PFKP可导致肾脏透明细胞癌细胞的生长减缓。结论我们的数据表明,PFKP不仅为肾脏透明细胞癌代谢重编程和维持细胞的增殖所需要,也可能为我们提供靶向肾脏透明细胞癌有效的目标。