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目的：
探讨甲基莲心碱增强STI571对K562/G01细胞敏感性,对细胞增殖、凋亡、bcr/abl融合基因和p210Bcr-abl融合蛋白表达的影响,为临床应用提供理论及实验依据。
方法：
采用改良四氮唑盐法(MTT)检测细胞毒性；流式细胞仪测定经药物处理的K562/G01细胞凋亡率；分光光度法检测定Caspase-3活性；RT-PCR法和蛋白免疫印迹(Western-blot)法检测Nef对bcr/abl融合基因及p210Bcr-abl融合蛋白表达的影响。
结果：
(1)@Nef2～64μmol/L、As2O310～160μmol/L对K562/G01细胞增殖均有抑制作用,Nef、As2O3对K562/G01细胞的IC10为8.1±0.16μmol/L、10.42±0.64。@STI571在K562细胞的IC50为0.63±0.04μmol/L,对K562/G01细胞的IC50为26.52±1.35μmol/L,K562细胞对STI571的耐药倍数是42.1倍。@Nef4μmol/L、Nef8
μmol/L、As2O310μmol/L与STI571(0.01～100μmol/L)联合用药组与STI571(0.01～100μmol/L)单独用药组相比均不同程度的降低了K562/G01细胞的IC50值,IC50由29.41±0.48μmol/L降至14.39±0.48、8.80±0.25和12.75±1.50μmol/L。
(2)①PI染色流式细胞术检测各给药组24、48、72和96h凋亡率,与阴性对照组相比Nef4μmol/L和8μmol/L组细胞凋亡率无显著增高(p>0.05),STI57110μmol/L联合Nef8μmol/L组与STI571组比的凋亡率显著增高(p<0.05)。@KS62/G01细胞经药物处理培养48h、96h后,采用分光光度法检测经药物处理48h后细胞Caspase-3活性,与阴性对照相比,Nef4μmol/L、8μmol/L组Caspase-3活性无显著增高(p>0.05),联合用药组Caspase-3活性显著高于STI571(p<0.05)组和As2O3组(p<0.05)；而经药物处理96h后,Nef4μmol/L、8μmol/L组Caspase-3活性显著增高(p>0.05)。
(3)①Western-blotting结果显示:与阴性对照组比较,Nef4μmol/L、8μmol/L组p210Bcr-abl曲。蛋白表达无显著变化(p>0.05)；与STI57110μmol/L组相比,STI57110μmol/L联合Nef8μmol/L用药组p210Bcr-abl蛋白表达显著下降(p<0.05)。②RT-PCR结果显示:与阴性对照组相比,Nef4、8μmol/L组bcr/abl融合基因表达无显著变化(p>0.05)；与STI571组相比,STI57110μmol/L联合Nef8μmol/L用药组bcr/abl融合基因表达显著下降(p<0.01)。
结论：
Ne侑邑提高K562/G01细胞对STI571敏感性；通过增强STI571对K562/G01细胞的促进凋亡及Caspase-3活化作用；同时Nef能增强STI571下调bcr/abl融合基因及p210Bcr-abl融合蛋白表达。