光谱法研究血清蛋白猝灭机理及铁离子传感器构建

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荧光传感器在环境水体检测,生物检测和生物成像等领域得到广泛应用。荧光传感器是利用荧光受体与待测物质之间存在的相互作用,依据荧光受体的荧光强度变化来实现检测物质。荧光传感技术因其快速,高灵敏,高选择性和制备简便的优势被广泛应用。运用量子点检测金属离子的方法由来已久,但是传统的量子点几乎全部是由重金属制成的。相比较半导体量子点昂贵的合成路线,CQDs不仅可以大规模、廉价的合成,而且具有水溶性、生物相容性、低毒性和化学惰性等优秀特性。CQDs富含羟基、羧基、羰基和环氧基等官能团,这些官能团使其拥有良好的水溶性,同样富含的官能团让CQDs具有通过有机、生物或聚合物的方法实现功能化的潜力。因此,CQDs可以被认为是优于传统半导体量子点的替代品,克服诸如合成昂贵、毒性和环境污染等问题。基于此,本文首先利用荧光猝灭法研究氧化石墨烯与牛血清蛋白之间的相互作用,其次依据荧光猝灭法构建检测铁离子的荧光纳米传感器,应用于水体检测。(1)通过荧光光谱法研究BSA与GO之间的相互作用,用Stern-Volmer方程计算出BSA与GO之间的荧光猝灭数据。在298K,306K和313K的三个不同温度下,计算得到猝灭常数Ksv值分别为3.025×104 L/mol,1.864×104 L/mol,1.462×104 L/mol,发现BSA与GO的猝灭常数随温度升高而降低,且猝灭速率常数kq的数值远大于最大碰撞速率常数,说明BSA与GO之间存在静态猝灭。使用修正后的Stern-Volmer方程对BSA于GO的猝灭过程进行绘图,表明BSA与GO的荧光猝灭机理是静态猝灭和动态猝灭相结合的联合猝灭过程。通过双曲线方程计算得到结合常数KA和结合位点n,KA的数值随着温度的升高而降低,进一步说明BSA与GO之间的猝灭过程主要是静态猝灭。随后紫外吸收曲线的观察,验证了 BSA与GO之间存在静态猝灭的可能。热力学研究表明,BSA和GO的猝灭过程中焓变(ΔH),熵变(ΔS)和吉布斯的值自由能(ΔG)均为负值,表明两者间相互作用力为范德华力或氢键,猝灭过程是放热且自发的。最后,同步荧光实验表明,GO的存在改变了 BSA的构象,Δλ=60nm时,BSA最大吸收峰的位置发生了偏移,证实GO是与色氨酸相互作用,导致其微环境改变。(2)通过简单沉积法制备CQDs/ZnO/CdS纳米颗粒,并将其用作高灵敏且快速的Fe(Ⅲ)离子荧光传感器。通过XRD、SEM的表征,以及紫外吸收光谱,稳态荧光光谱的检测,验证了 CQDs/ZnO/CdS纳米颗粒的制备成功。在后续离子检测实验中发现该纳米颗粒对铁离子呈现较为出色的识别性能,并进一步通过其他金属离子的干扰实验,验证CQDs/ZnO/CdS纳米颗粒对Fe(Ⅲ)离子检测的特异性。接着通过不同浓度铁离子与纳米颗粒的荧光强度变化,与铁离子浓度绘制拟合曲线,并计算出检出限为1.72×10-7M,检出范围为1-50μM。利用该荧光传感器,通过添加法实现检测实际水体中的铁离子。通过Stern-Volmer方程计算复合纳米粒子与Fe(Ⅲ)离子之间的猝灭常数,由猝灭常数随温度升高而降低得出猝灭过程应为静态猝灭。荧光寿命试验同样验证其猝灭过程为静态猝灭。根据热力学分析,纳米粒子与Fe(Ⅲ)离子之间的熵和焓均为正值,自由能为负值,说明两者的相互作用力可能是疏水力,且猝灭过程是吸热、自发进行。
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