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前言： 子痫前期(preeclampsia，PE)，也称先兆子痫，是妊娠期所特有的一种疾病，发病率约1～5％，为孕产妇及围产儿发生死亡的重要原因。目前对子痫前期发病机制的研究已经成为围产医学领域的关注的重点，并且已经形成了多种学说，其中胎盘缺血学说受到了广大学者的支持。该学说认为，妊娠期中多种原因导致的滋养细胞浸润能力降低造成了胎盘形成和植入障碍，进而引起子宫肌层内螺旋小动脉重铸失败，胎盘血流灌注不足造成胎盘缺血缺氧。随后，胎盘释放大量毒性物质，引起全身性母体血管内皮细胞损伤和功能紊乱，形成子痫前期。 胚胎着床过程中滋养层入侵子宫内膜的过程和肿瘤细胞的浸润转移的生物学行为十分相似，受到多种因素的影响。Notch信号转导通路是决定细胞命运的重要通路之一，能够调控细胞的分化、存活与凋亡，与多种细胞、组织和器官的发生和发育密切相关。近年，有报道指出Notch-1信号通路能够影响小鼠胎盘滋养层的浸润，且在子痫前期病人的胎盘中检测到Notch-1表达的下调，所以我们推测Notch-1表的下调可能导致滋养细胞浸润不足从而参与了子痫前期的发病过程，但其作用机制仍未明确。 NF-κB是细胞信号传导通路中的枢纽，也是Notch-1的下游基因，目前已发现其靶基因IL-1、MMP2、MMP-9、Bcl-2、Gadd45b、VEGF等，能够参与细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移以及血管生成，均与滋养细胞的浸润及转移直接相关。据此推测Notch-1可能通过NF-κB信号通路调控着相关基因的表达而影响了滋养细胞的浸润。 目的： （一）采用RNA干扰技术抑制永生化滋养细胞系JEG-3中Notch-1的表达，并探讨Notch-1表达下调对细胞迁移及侵袭的影响;（二）探讨Notch-1表达下调对滋养细胞中NF-κB信号通路及其下游靶基因的影响;（三）探讨Notch-1表达下调对滋养细胞中侵袭转移以及上皮-间质转化相关因子的影响。 实验方法： 1.RNAi介导的Notch-1表达下调对滋养细胞侵袭转移能力影响 根据siRNA设计的基本原则设计2条Notch-1的siRNA干扰序列以及1条阴性对照序列转染永生化的滋养细胞系JEG-3细胞，采用Real-time PCR和Westernblot检测Notch-1的表达，筛选有效干扰序列。采用有效干扰序列转染细胞，实验设置:未转染细胞对照组（Control）、Lip2000转染组(Lip2000)、Notch-1-siRNA-1转染组、Notch-1-siRNA-2转染组和转染siRNA阴性对照组(NC);细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室法检测各组细胞的侵袭能力。 2.RNAi介导的Notch-1表达下调对NF-κB信号通路的影响 Notch-1干扰质粒转染细胞，提取各组细胞核蛋白，采用凝胶电泳迁移率实验检测各组细胞NF-κB的活性;将NF-κB荧光素酶报告基因质粒分别与Notch-1干扰质粒共转染JEG-3细胞，采用双荧光素酶报告基因检测系统检测NF-κB的启动子结合活性;分别提取各组细胞核蛋白和胞浆蛋白，Western blot检测核内NF-κB以及胞浆磷酸化IkBα的表达;Real-time PCR各组细胞NF-κB靶基因IL-1β、Bcl-2以及Gadd45b的表达。 3.RNAi介导的Notch-1表达下调对MMPs和EMT相关分子的影响 Notch-1干扰质粒转染细胞，24 h后采用ELISA法检测各组细胞上清液中MMP-2、MMP-9以及VEGF的含量;Western blot检测各组细胞中侵袭及血管生成相关因子MMP-2、MMP-9和VEGF的表达水平;Western blot检测各组细胞上皮-间质转化相关因子E-cadherin、vimentin、slug、snail以及twist的表达。 4.统计分析 采用SPSS16.0软件进行数据的统计分析，数据均以(x)±s表示，采用ANOVA法进行组间比较，P＜0.05表示差异具有统计学意义。 结果： 1.RNAi介导的Notch-1表达下调对滋养细胞侵袭转移能力影响 (1) Real-time PCR检测结果，与对照组相比阴性对照组Notch-1mRNA的表达无显著变化，Notch-1-siRNA-1和Notch-1-siRNA-2转染组Notch-1mRNA的表达量分别降低了67％和70％，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (2) Western blot结果，与对照组相比阴性对照组Notch-1蛋白的表达无显著变化，Notch-1-siRNA-1和Notch-1-siRNA-2转染组Notch-1蛋白的相对表达量分别降低了61％和63％，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (3)细胞划痕检测各组细胞迁移能力结果，与对照组相比转染12 h和24 h后Notch-1-siRNA-1组和Notch-1-siRNA-2组细胞迁移距离显均著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (4) Transwell检测细胞侵袭结果，转染24 h后Notch-1-siRNA-1组和Notch-1-siRNA-2组侵袭细胞个数均显著低于对照组(P＜0.05)。 2.RNAi介导的Notch-1表达下调对NF-κB信号通路的影响 (1)凝胶电泳迁移率实验检测NF-κB活性，与对照组相比Lip2000组与阴性对照组NF-κB的活性未发生明显变化，而Notch-1-siRNA-1和Notch-1-siRNA-2组激活的NF-κB明显低于对照组，表明抑制Notch-1能够阻碍NF-κB的激活。 (2)双荧光素酶报告基因检测系统检测表明，与对照组相比Notch-1-siRNA-1转染组和Notch-1-siRNA-2转染组Firefly/Renilla比值分别降低了0.38和0.46，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (3) Western blot检测胞浆p-IκB以及核内NF-κB的结果与对照组相比Notch-1-siRNA-1组和Notch-1-siRNA-2组胞浆p-Iκ Bα的表达分别降低了0.35和0.34，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与对照组相比Notch-1-siRNA-1组和Notch-1-siRNA-2组核内NF-κB的表达分别降低了0.50和0.47，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (4) Real-time PCR检测结果表明与对照组相比转染试剂组及阴性对照组IL-1β、Bcl2、Gadd45b mRNA的表达均无显著变化，而Notch-1-siRNA-1转染组和Notch-1-siRNA-2转染组IL-1β、Bcl2的表达均显著降低，Gadd45b表达显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 3.RNAi介导的Notch-1表达下调对MMPs和EMT相关分子的影响 (1) Western blot及ELISA检测结果表明Notch-1-siRNA-1转染组和Notch-1-siRNA-2转染组细胞及上清中MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白的表达显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (2) Western blot结果表明，与对照组相比Notch-1-siRNA-1转染组和Notch-1-siRNA-2转染组E-cadherin蛋白表达显著升高，vimentin，slug，snail以及twist的表达显著降低，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。 结论： 1.下调Notch-1的表达能够显著抑制永生化滋养细胞JEG-3的迁移及侵袭能力; 2.下调Notch-1的表达能够阻碍JEG-3中NF-κB的激活并抑制其下游信号通路; 3.Notch-1表达的下调能够影响滋养细胞的浸润和血管形成能力，阻碍细胞的上皮-间质转化; 4.Notch-1能够通过NF-κB信号通路参与滋养细胞浸润，与子痫前期的发生密切相关。