目的:通过对人肾癌细胞的无血清培养获取肾癌干细胞,找出人肾癌干细胞的成熟的培养方法;进一步检测肾癌细胞、肾癌干细胞中端粒酶的活性,从而探讨端粒酶活性在肾癌发生、发展及治疗方面的重要意义。方法:利用含有表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)的DMEM/F12培养基无血清悬浮培养分离肾癌干细胞,并观察其生长特性;通过流式细胞仪检测其CD133、CD34的表达情况及其凋亡率,以正常肾组织细胞及肾癌细胞作为对照,采用端粒重复序列扩增的方法(Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP)实时定量检测肾癌干细胞端粒酶的活性。结果:肾癌干细胞接种于DMEM/F12无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中;2天后有细胞球生成,每个细胞球含3～8个细胞,折光性较强;7天后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形。无血清培养的肾癌干细胞球CD133~+CD34~-率明显高于含血清培养的肾癌细胞CD133~+CD34~-率,凋亡率较血清培养的肾癌细胞低;正常肾组织细胞未检测出有CD133及CD34的表达,三者间比较有显著意义(F=328.25,P＜0.05)。肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞(F=278.74,P＜0.05),而前二者之间端粒酶活性无明显差异。结论:与含血清培养的肾癌细胞相比无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133呈高表达,有着较低的凋亡率,二者端粒酶的活性均高于正常肾组织细胞。