【摘 要】
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观察并检测弓形虫三个不同分离株主要表面抗原SAG3等基因DNA免疫所诱导的小鼠体液和细胞免疫应答;研究这些基因体外表达产物的抗原性及其在小鼠肌肉组织中的表达;探讨IL-2、I
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观察并检测弓形虫三个不同分离株主要表面抗原SAG3等基因DNA免疫所诱导的小鼠体液和细胞免疫应答;研究这些基因体外表达产物的抗原性及其在小鼠肌肉组织中的表达;探讨IL-2、IFN-γ基因的免疫协同作用及DNA免疫对弓形虫感染的保护性;为弓形虫病的免疫预防提供理论及实践依据.同时对弓形虫几个具有潜力的基因加以分析、比较,以期获得理想的临床基因诊断弓形虫感染或弓形虫病的目的基因.方法:第一部分:弓形虫SAG3等基因的克隆及表达;1.pGEX-4T-1-SAG3(pGEX-SAG3)原核表达重组质粒的构建及在大肠杆菌DE3/BL21中的表达把SAG3的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-SAG3重组质粒.转化感受态大肠杆菌DE3/BL21株,经IPTG诱导后进行表达,应用SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达产物.第二部分:pcSAG3、pcSAG1、pEGFP-SAG1、pEGFP-SAG3、pcSAG1/SAG3、pc IL-2和pcIFN-γ重组质粒DNA免疫小鼠所诱导的免疫应答.第三部分:弓形虫基因诊断研究;SAG1、SAG3、SAG2、ROP1、B1基因和(弓形虫基因组中重复200-300次,单元为529bp的DNA片段,我们称其为"TgP重复序列",以下简称为"TgP")PCR、酶切和测序鉴定根据RH株SAG1、SAG3、SAG2、ROP1、B1基因和TgP设计多对引物,采用PCR技术从RH、ZS1、ZS2株基因组中特异扩增其基因;将扩增产物分离、纯化,分别用Sac I、Xho I和Taq I等内切酶进行鉴定;另将纯化的扩增产物进行测序和酶切鉴定.第三部分:弓形虫基因诊断方面研究;SAG1、SAG3、SAG2、ROP1、B1和TgP基因PCR、酶切和测序鉴定提取的RH、ZS1和ZS2株速殖子基因组DNA,PCR扩增出SAG1、SAG3、SAG2、ROP1、B1基因和弓形虫基因组P重复DNA片段基因;将纯化的扩增产物进行测序和酶切鉴定与预期理论值相符.
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