Identification of the Interaction Between Sllp1 and Pdia3 of Sheep

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分子水平上阐明受精过程一直是有性繁殖研究中的一大难题。解决这一难题对生命的繁殖和成功的体外受精都至关重要。研究发现,精子和卵子融合在一起形成受精卵,而蛋白质间的相互作用影响受精过程。为了成功受精,精子需要具备穿透卵子外层的能力。受精过程主要分为三个部分:精子获能,精子与透明带结合诱发顶体反应;以及精子与卵子结合并且膜融合。sllp1由位于17q11.2的SPACA3编码。SLLP1抗体和重组蛋白阻断小鼠体外受精和精卵结合,表明SLLP1可能在精卵相互作用中发挥重要作用。PDIA3也被称为ERp57,属于蛋白二硫键异构酶(Protein disulfide isomerase,PDI)家族,能够催化蛋白中的二硫键反生氧化还原反应。先前的研究表明,PDIA3也可能参与精子运动和配子融合。到目前为止,这两种蛋白质之间是否存在相互作用仍然未知。  因此,我们从雄性绵羊睾丸组织中克隆了sllp1基因,长度为566bp;并且构建了原核表达重组载体pET-28a-sllp1,表达和纯化重组蛋白质SLLP1-HIS。本研究构建了酵母双杂交重组载体pGAD-sllp1和pGBK-pdia3,分别转化Y187、Y2H Gold菌株并杂交,在SD/-Trp/-His/-Ade/-Leu/X-α-Gal/AbA缺陷型固体培养基上长出了蓝色菌落。结果初步证明,两种蛋白之间存在相互作用。构建了哺乳动物双杂交系统的pACT-pdia3、pBIND-sllp1载体,结果以均数±标准差(n=3)表示,单因素方差分析执行。阳性对照组p<0.01,存在显著差异;实验组p<0.01,具有明显差异,表明PDIA3和SLLP1在293T细胞中有较强的相互作用。上述实验结果表明,PDIA3和SLLP1之间存在直接的相互作用。
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