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目的高同型半胱氨酸血症（HHcy）是动脉粥样硬化的独立危险因子，动脉粥样硬化是一种以脂质、纤维物质和细胞碎片等聚集在血管壁为特征的复杂的炎症性疾病，而趋化因子在其中发挥重要作用。单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）被认为是最重要和最具特征的趋化因子，其在正常动脉中不表达，而在动脉粥样硬化损伤处表达增加。DNA甲基化可以解释基因、环境和疾病之间的相互关系，是动脉粥样硬化的早期诊断标志，同时可以调节相关基因的表达。本实验拟在ApoE-/-鼠上，探讨HHcy是否通过调节血液MCP-1DNA低甲基化，而促进动脉粥样硬化的发生，同时研究NF-κB/DNMT1在其机制中的作用。方法选用SPF级近交系C57BL/6J背景的5周龄雄性ApoE-/-小鼠为研究对象，适应环境一周后，将小鼠随机分为4组：空白对照组、ApoE-/-对照组、高蛋氨酸组、叶酸和维生素B12干预组，饲养14周后处死，进行后续实验。培养THP-1单核细胞，以4×106个接种于25cm×25cm培养瓶中，加入PMA，使其终浓度为500nmol/L，37℃培养48小时，显微镜下观察细胞贴壁状态，证实THP-1细胞已分化为巨噬细胞。弃去旧培养液，更换为含终浓度为50mg/L的ox-LDL和100μmol/L Hcy的RPMI-1640培养基培养24小时，观察泡沫细胞的形成，并用于后续实验。实验分为3组：对照组、泡沫细胞+100μmol/LHcy组（Con+100Hcy）、泡沫细胞+100μmol/L Hcy+50μmol/L PDTC组（Con+100Hcy+50PDTC）。采用主动脉病理切片HE染色，泡沫细胞油红O染色，全自动生化分析仪检测血清Hcy含量，巢式降落式甲基化特异性PCR（ntMS-PCR）检测MCP-1DNA甲基化改变，酶联免疫吸附法检测MCP-1、DNMT1、核转录因子-κB的含量，高效液相色谱法检测血清SAH、SAM含量。结果1. Hcy致小鼠血管壁损伤形态学变化及血清Hcy含量结果与空白对照组比较，高蛋氨酸组小鼠主动脉管壁可见大量动脉粥样硬化样物质，泡沫细胞和少量炎症性细胞。叶酸和维生素B12干预组小鼠主动脉管壁病变较高蛋氨酸组有所缓解。高蛋氨酸组小鼠血清Hcy水平显著增加，叶酸和维生素B12干预组血清Hcy水平较高蛋氨酸组降低（P<0.05）。由此表示，小鼠HHcy和动脉粥样硬化双模型建立成功。2.小鼠血清SAM和SAH含量与空白对照组比较，ApoE-/-对照组、高蛋氨酸组和干预组的血清中SAM含量分别增加3、3.6、2.45倍（P<0.05），而尤以高蛋氨酸组血清SAM水平增加明显。高蛋氨酸组血清SAH含量与空白对照组比较明显增加（P<0.05）。3. Hcy致小鼠MCP-1DNA低甲基化与空白对照组比较，高蛋氨酸组MCP-1DNA发生明显低甲基化（P<0.05）。MCP-1DNA低甲基化水平与动脉粥样硬化损伤面积两者呈正相关（γ=0.5175，P<0.05）。4. Hcy致血清MCP-1分泌增加与空白对照组比较，高蛋氨酸组血清MCP-1含量明显增加（P<0.05）。5.血清NF-κB和DNMT1含量与空白对照组比较，高蛋氨酸组血清NF-κB含量明显升高（P<0.05），而叶酸和维生素B12干预组与高蛋氨酸组比较，血清含量降低约2.9倍（P<0.01）。高蛋氨酸组血清DNMT1含量较空白对照组降低约20.8%（P<0.01），而叶酸和维生素B12干预组血清DNMT1含量较高蛋氨酸组轻微升高（P<0.05）。血清NF-κB和DNMT1含量两者呈负相关（γ=0.3394，P<0.05）。6.泡沫细胞NF-κB和DNMT1含量油红O染色后显微镜下观察可看到脂滴面积等于或大于细胞核的面积，呈红色泡沫样改变，细胞核呈蓝色的泡沫细胞。100μmol/L Hcy组NF-κB含量与对照组比较显著升高（P<0.01）。添加PDTC干预后泡沫细胞NF-κB含量与100μmol/L Hcy组比较显著降低（P<0.01）。而100μmol/L Hcy组DNMT1含量与对照组比较降低显著（P<0.01），添加PDTC干预后泡沫细胞DNMT1含量与100μmol/L Hcy组比较升高（P<0.05）。结论1. HHcy使MCP-1DNA低甲基化，促进动脉粥样硬化的形成。2. NF-κB/DNMT1在Hcy致MCP-1DNA低甲基化中发挥作用。3.在HHcy致泡沫细胞形成中NF-κB与DNMT1呈负相关。